Для одновременного выявления антигена вич и выявления сероконверсии к вирусу иммунодефицита человека 1 типа (вич-1, вич-1 группы O) и к вич 2 типа в сыворотке и плазме крови человека

Комбинированная иммуноферментная тест-система для одновременного выявления антигена ВИЧ и выявления сероконверсии к вирусу иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1, ВИЧ-1 группы O) и к ВИЧ 2 типа в сыворотке и плазме крови человека

Обратите внимание на выделенные изменения

См. раздел РЕАГЕНТЫ для полного пояснения символов, используемых для обозначения компонентов набора.

НАЗВАНИЕ

Murex HIV Ag/Ab Combination

НАЗНАЧЕНИЕ

Усовершенствованная тест-система предназначена для выявления сероконверсии вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ 1, ВИЧ-1 группы O) и выявления антител к ВИЧ 2 типа (анти ВИЧ 2) методом иммуноферментного анализа.

РЕЗЮМЕ И ОПИСАНИЕ ТЕСТА

Синдром приобретенного иммунодефицита человека (СПИД) вызывается двумя типами вируса иммунодефицита человека: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Оба являются ретровирусами и передаются с некоторыми биологическими жидкостями организма, преимущественно с кровью и генитальными секретами, а также трансплацентарно. ВИЧ-1 распространен по всему миру; ВИЧ-2 обнаруживается в основном в Западной Африке и некоторых странах Европы.¹

Показана существенная антигенная перекрестная реактивность белков gag и pol двух типов вирусов, в то время как перекрестная реактивность гликопротеинов оболочки отмечается реже.

При скрининге с целью выявления антител к обоим типам вируса на всех стадиях инфекции важно кроме основных перекрестно реагирующих белков gag и pol, анализировать эпитопы белков оболочки обоих вирусов.^2,3 У пациентов из Камеруна и Европы были обнаружены варианты ВИЧ-1, объединенные в группу О.^4,5 Вирусы группы О сильно отличаются от описанных первоначально подтипов ВИЧ-1 (относящихся к группе М). Для выявления антител к вирусу группы О у инфицированных индивидов могут использоваться специфичные эпитопы оболочки вируса этой группы; перекрестная реактивность с другими подтипами ВИЧ не значима.⁶ В ответ на инфицирование ВИЧ возникает реакция образования специфичных антител: вначале иммуноглобулинов М (IgM), а в последующем – иммуноглобулинов G (IgG).⁷ Максимальная чувствительность в выявлении сероконверсии антител к ВИЧ достигается в таких анализах, в которых определяются как IgM, так и IgG, ядерный антиген обычно обнаруживается кратковременно перед появлением антител.

В анализе Murex HIV Ag/Ab Combination выявляется ядерный антиген ВИЧ, а также IgG, IgM и IgA к гликопротеинам оболочки и перекрестно реагирующим белкам pol ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Анализ позволяет идентифицировать потенциально инфицированные образцы сыворотки крови и плазмы крови с ЭДТА и цитратом.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИНЦИПЫ ПРОЦЕДУРЫ

В анализе Murex HIV Ag/Ab Combination используются микроячейки, покрытые синтетическим пептидом, представляющим иммунодоминантный участок ВИЧ-1 (О), рекомбинантным белком, полученным из белков оболочки ВИЧ-1 и ВИЧ-2, белком pol ВИЧ и моноклональными антителами к р24 ВИЧ-1. Конъюгат представляет собой смесь тех же эпитопов и различных моноклональных антител, в том числе и к р24, меченных пероксидазой хрена.

Образцы и контрольная сыворотка инкубируются в ячейках; реактивный ядерный антиген ВИЧ и/или антитела к ВИЧ из образца или контрольной сыворотки связываются с антителами и/или антигенами на микроячейках. Затем проводится промывание для удаления образца и оставшихся антител. На последующем этапе добавляется конъюгат, который, в свою очередь, связывается с реактивным ядерным антигеном ВИЧ и/или специфическими антителами, ранее связавшимися с реагентами на ячейках. В образцах, не содержащих реактивного ядерного антигена или специфических антител, связывания конъюгата с ячейкой не происходит.

После промывания для удаления несвязанного конъюгата в ячейки добавляется раствор, содержащий 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (ТМБ) и перекись водорода. В ячейках со связавшимся конъюгатом появляется сине-зеленое окрашивание, которое сменяется на оранжевое после добавления серной кислоты для остановки реакции. Интенсивность окрашивания оценивается спектрофотометрически при 450 нм.

РЕАГЕНТЫ

Описание, подготовка к использованию и условия хранения

Смотрите также Меры предосторожности.

Если не указано иного, все компоненты должны храниться при температуре 2-8°С. В этих условиях активность сохраняется в течение всего срока годности.

Coated wells

Ячейки, покрытые антигеном

1 плашка (7G79-01) или 5 плашек (7G79-02), содержащие по 96 ячеек, покрытых антигеном ВИЧ и моноклональными антителами.

Перед извлечением ячеек из упаковки дайте им достичь комнатной температуры (18 30°С). Неиспользованные ячейки поместите в прилагаемый закрывающийся пакет для хранения и поместите в холодильник (2 8°С).

sample dil

Разбавитель образца

1 флакон, содержащий 18 мл буфера зеленого/коричневого цвета, содержащий бычий и мышиный белки, детергент и сапонин. Консервант: ProClin® 300, 0,05%.
conjugate

Конъюгат

1 флакон (7G79-01) или 3 флакона (7G79-02), содержащих по 1,1 мл лиофилизированных антигенов ВИЧ и моноклональных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена. После восстановления содержимое одного флакона рассчитано на 2 плашки.
conjugate dil

Разбавитель конъюгата

1 флакон (7G79-01) или 3 флакона (7G79-02), содержащих по 22 мл раствора, состоящего из буфера, бычьего белка, сапонина и детергента, желтого цвета. Содержимое 1 флакона рассчитано на восстановление 1 флакона конъюгата. Консервант: ProClin® 300, 0,1%.
Восстановление конъюгата

Для полного удаления конъюгата, скопившегося под резиновой крышкой, аккуратно постучите кончиком пробирки по столу. Перелейте все содержимое флакона с разбавителем конъюгата во флакон с конъюгатом, закройте его крышкой и перемешайте его содержимое, аккуратно переворачивая. Оставьте флакон на 30 минут, иногда взбалтывая содержимое. Восстановленный конъюгат имеет красную окраску. Если необходимо, восстановленный конъюгат можно перелить обратно в пластиковый флакон из-под разбавителя конъюгата.

Восстановленный конъюгат можно хранить при температуре 2-8°С до 4 недель.
control 1 +

Положительная контрольная сыворотка анти-ВИЧ-1

1 флакон, содержащий 1,7 мл инактивированной сыворотки крови человека в буфере с бычьим белком.

Консервант: Bronidox®, 0,05%.

control 2 +

Положительная контрольная сыворотка анти-ВИЧ-2

1 флакон, содержащий 1,7 мл инактивированной сыворотки крови человека в буфере с бычьим белком.

Консервант: Bronidox®, 0,05%.

control р24 +

Положительный контроль р24 ВИЧ-1

1 флакон, содержащий 1,7 мл рекомбинантного антигена р24 в буфере с бычьим белком.

Консервант: Bronidox®, 0,05%.

control -

Отрицательный контроль

Murex HIV Ag/Ab Combination
2 флакона, содержащих по 2,5 мл нормальной сыворотки крови человека.

Консервант: Bronidox®, 0,05%.

substrate dil

Разбавитель субстрата

1 флакон, содержащий 35 мл бесцветного раствора тринатриевой соли цитрата и перекиси водорода.
substrate conc

Концентрат субстрата

1 флакон, содержащий 35 мл раствора оранжевого цвета: 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (ТМБ) и стабилизаторы.
Приготовление раствора субстрата

Приготовьте раствор субстрата в чистом стеклянном или пластиковом сосуде, добавив бесцветный разбавитель субстрата к равному количеству оранжевого концентрата субстрата.

Очень важно соблюдать этот порядок смешивания и следить, чтобы все используемые пипетки и контейнеры были чистыми. Кроме того, раствор субстрата можно приготовить, перелив все содержимое флакона с разбавителем субстрата во флакон с концентратом субстрата. 1 флакон раствора субстрата рассчитан как минимум на 5 плашек – см. таблицу 1.

Таблица 1

Необходимый объем концентрата субстрата и разбавителя субстрата

Кол-во ячеек											Кол-во плашек
8	16	24	32	40	48	56	64	72	80	96	1	2	3	4
Концентрат субстрата (мл)
0,5	1,0	2,0	2,5	2,5	3,0	3,5	4,0	4,5	4,5	6,0	6	12	18	22
Разбавитель субстрата (мл)
0,5	1,0	2,0	2,5	2,5	3,0	3,5	4,0	4,5	4,5	6,0	6	12	18	22

При использовании автоматической системы может понадобиться дополнительное количество реагентов. Не допускайте попадания прямых солнечных лучей. Раствор субстрата должен быть бледно-желтым; если он имеет зеленый цвет, необходимо вылить его и приготовить свежий раствор.

Приготовленный раствор субстрата из этого набора и растворы из других наборов Murex, в которых используется концентрат субстрата оранжевого цвета, могут быть взаимозаменяемы. Проверьте, чтобы раствор субстрата был приготовлен из разбавителя субстрата и концентрата субстрата из одного набора.

Приготовленный раствор субстрата сохраняет стабильность в течение 2 суток при хранении в холодильнике (2 8°С) или при 15-25°С; при выпадении кристаллов раствор необходимо выбросить.

wash fluid

Промывочная жидкость

1 (7G79-01) или 2 (7G79-02) флакона, содержащих по 125 мл 20-кратного концентрата промывочной жидкости (глицин/борат). Консервант: Bronidox®, 0,2%.

Разведите промывочную жидкость дистиллированной или деионизироанной водой в соотношении 1:20 для получения необходимого количества раствора, или разведите все содержимое одного флакона промывочной жидкости до 2500 мл. Концентрат промывочной жидкости может содержать кристаллы, они растворятся после разведения до рабочей концентрации. Разведенная промывочная жидкость содержит консервант Bronidox® в концентрации 0,01%.

Промывочная жидкость из этого набора и промывочные жидкости из других наборов Murex, содержащие глицин/борат, могут быть взаимозаменяемы. При разведении промывочной жидкости будьте внимательны, убедитесь, что оно проведено в правильном соотношении (1:20).

Промывочную жидкость в рабочем разведении храните при температуре 18-30°С в закрытом сосуде, при этих условиях она сохраняет свои свойства в течение 1 месяца.

Примечание: При хранении промывочная жидкость может стать желтого цвета. Это не влияет на качество анализа и аспирацию промывочной жидкости из ячеек.

Примечание: Несмотря на то, что можно использовать раствор субстрата и промывочную жидкость из других наборов, не используйте их по истечении сроков годности, напечатанных на этикетках их компонентов.

Меры предосторожности

IVD

Только для диагностики in vitro.

Только для профессионального использования.

Следуйте рекомендациям производителя и информации на этикетках по использованию потенциально опасных компонентов.

Правила безопасности

ВНИМАНИЕ: В этом продукте содержатся компоненты, полученные от человека.

Образцы сыворотки крови человека, использовавшиеся для изготовления компонентов набора, были протестированы на наличие следующих аналитов (табл. 2).

Таблица 2

Компонент

Реактивен на

Не реактивен на

Отрицательный контроль

Н/Р

HBsAg

Антитела к HCV, ВИЧ-1 и ВИЧ-2

Положительный контроль 1

Антитела к ВИЧ-1

HBsAg
Антитела к HCV

Положительный контроль 2

Антитела к ВИЧ-2

HBsAg
Антитела к HCV

Все реактивные образцы сыворотки перед приготовлением из них реагентов набора были инактивированы. Однако все материалы человеческого происхождения должны считаться потенциально инфицированными. С набором реагентов и образцами пациентов рекомендуется обращаться с соблюдением правил работы в лабораториях.

Разбавитель образца содержит 0,05%-ный ProClin® 300, разбавитель конъюгата содержит 0,1%-ный ProClin® 300. Согласно директивам Европейского экономического сообщества (ЕЭС) они относятся к раздражающим веществам (Xi). Ниже приводятся пояснения к значкам «риск» (R) и «меры предосторожности» (S).

R43 При попадании на кожу может приводить к сенсибилизации.

S24 Не допускайте попадания на кожу.

S35 Материал и контейнер, в котором он хранился, должны утилизироваться с соблюдением правил безопасности.

S37 Используйте защитные перчатки.

S46 При попадании внутрь следует немедленно обратиться к врачу и показать ему контейнер или этикетку.

Концентрат субстрата содержит лимонную кислоту и, согласно директивам Европейского экономического сообщества (ЕЭС), относится к едким веществам (С). Ниже приводятся пояснения к значкам «риск» (R) и «меры предосторожности» (S).

R35 Вызывает тяжелые ожоги.

S26 При попадании в глаза немедленно промойте их большим количеством воды и обратитесь к врачу.

S35 Материал и контейнер, в котором он хранился, должны утилизироваться с соблюдением правил безопасности.

S36/37/39 Используйте защитную одежду, перчатки и защитные средства для глаз и лица.

S45 При несчастных случаях или появлении плохого самочувствия следует немедленно обратиться к врачу (по возможности показав ему этикетку).

Информация для европейских распространителей: Данные по безопасности продуктов, не относящихся к классу опасных в соответствии с Европейскими директивами 1999/45/ЕС, предоставляются по требованию профессиональных пользователей.

Потенциально контаминированные материалы следует утилизировать с соблюдением местных правил.
Капли пролитых потенциально инфицированных материалов нужно немедленно промокнуть впитывающей бумажной салфеткой и до продолжения работы протереть зону загрязнения 1,0% ным раствором гипохлорита натрия.⁸ Следы кислотосодержащих жидкостей нельзя обрабатывать гипохлоритом натрия, пока зона загрязнения не вытерта насухо. Материалы, использованные для вытирания пролитой жидкости, в том числе перчатки, следует утилизировать с соблюдением правил для потенциально биологически опасных материалов. Материалы со следами гипохлорита натрия нельзя автоклавировать.
Нейтрализованные кислоты и другие жидкие отходы обеззараживают путем добавления гипохлорита натрия в конечной концентрации, равной как минимум 1,0%. Для эффективного обеззараживания может потребоваться обработка 1,0%-ным раствором гипохлорита натрия в течение 30 минут.
Не пипетируйте ртом. При работе с образцами и проведении анализа используйте одноразовые перчатки и защитные средства для глаз. После завершения работы тщательно мойте руки.
При попадании любого реагента на кожу или в глаза, немедленно промойте их большим количеством воды.
Серная кислота, необходимая для получения стоп-раствора, и соляная кислота, используемая для промывания стеклянной посуды, являются едкими веществами. При обращении с ними соблюдайте соответствующие меры безопасности. При попадании этих кислот на кожу или в глаза, тщательно промойте их водой.

Меры предосторожности во время анализа

Не используйте реагенты с истекшим сроком годности. Не допускайте бактериального загрязнения реагентов, что может приводить к уменьшению срока годности продукта и получению ошибочных результатов анализа.
Не отступайте от порядка Процедуры анализа и не используйте реагенты других производителей или из других наборов, если не указано, что они являются взаимозаменяемыми. Не уменьшайте рекомендуемое время инкубации.
Все реагенты и образцы перед использованием должны быть комнатной температуры (18-30°С). Сразу после применения верните их в рекомендуемые для хранения условия.
Стеклянную посуду, в которую наливали реагенты, необходимо тщательно промыть соляной кислотой (2М), а затем дистиллированной или деионизированной водой высокого качества.

Murex HIV Ag/Ab Combination

Не используйте для хранения реагентов и образцов саморазмораживающуюся морозильную камеру.
Не допускайте воздействия на реагенты яркого света или паров гипохлорита в процессе хранения или инкубации.
Во время процедуры анализа не допускайте высыхания ячеек.
Не допускайте перекрестной контаминации реагентов. Пипетка для переноса раствора субстрата в анализах Murex должна быть надписана. Кроме того, должны быть надписаны пипетки для переноса конъюгата.
Не трогайте и не допускайте попадания брызг на край ячейки с конъюгатом. Не выдувайте содержимое из пипетки, рекомендуется использовать обратное пипетирование.
Перед началом анализа проверьте, чтобы дно плашки было чистым и сухим, а на поверхности жидкости не было пузырьков.
Не допускайте попадания в микроячейки порошка с одноразовых перчаток.
При работе с автоматическими анализаторами для микроплашек, не обязательно использовать крышки для плашек и высушивать ячейки.
Не позволяйте жидкостям из автоматического анализатора попадать в образцы и реагенты.
Убедитесь, что температурные условия во время анализа соответствуют требованиям протокола анализа.
Не используйте СО₂-инкубатор.
Не храните стоп-раствор в неглубокой посуде или переливайте его обратно во флакон после использования.

Сбор, транспортировка и хранение образцов

Сбор образцов

Для анализа можно использовать образцы сыворотки крови или плазмы крови с ЭДТА или цитратом. Проверьте, чтобы в образцах сыворотки свертывание было полным. При наличии любых видимых взвешенных частиц, удалите их путем центрифугирования.
Транспортировка и хранение образцов

Образцы следует хранить при температуре 2 8°С. Если анализ образца не будет проведен в течение 72 часов, его нужно отделить от сгустков и форменных элементов и хранить замороженным (при температуре -15°С или более низкой). Многократного замораживания и размораживания образцов необходимо избегать. После размораживания перед анализом образцы нужно тщательно перемешать.

ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА

Необходимые материалы, не входящие в набор

Стоп-раствор (серная кислота, от 0,5М до 2М), добавьте от 3 мл (0,5М) до 11 мл (2,0М) концентрированной серной кислоты аналитической чистоты (18,0М) к 80 мл дистиллированной или деионизированной воды, а затем, добавив еще воды, доведите общее количество до 100 мл. Кроме того, можно использовать следующий реагент: серная кислота, 1N (кат. № 7212-05).
Свежая дистиллированная или деионизированная вода высокого качества необходима для разведения промывочной жидкости, для приготовления стоп-раствора и использования в автоматических промывателях.
Одно- и многоканальные микропипетки необходимых объемов.
Инкубатор, поддерживающий температуру, указанную в протоколе анализа.
Нагревательный блок (кат. № 5F09-02). Для использования в инкубаторах. Лучше всего держать нагревательный блок в инкубаторе, в котором он применяется. Если же это невозможно, помещайте блок в инкубатор как минимум за 4 часа до начала анализа.
Аппаратура

а) автоматическая система для промывания микроплашек

б) регистрирующая система для оценки результата анализа в микроплашках

или

в) полностью автоматический анализатор для микроплашек.

Перед использованием всей аппаратуры должна быть проверена правильность ее работы.

Полную информацию о рекомендуемых системах, протоколах программного обеспечения и процедурах проверки можно получить у местного представителя.

Одноразовые ванночки для реагентов (кат. № 5F24-01).
Гипохлорит натрия для обеззараживания.

Процедура анализа

Перед началом анализа внимательно прочитайте раздел Меры предосторожности во время анализа.

Визуально контролируйте внесение различных компонентов в ячейки по соответствующему окрашиванию.

Разбавитель образца имеет зеленую/коричневую окраску. При добавлении образца пациента или контроля цвет изменяется на синий/зеленый. Цвет разбавленных образцов может отличаться, но изменение окраски должно наблюдаться. Добавление образца или контроля можно подтвердить с помощью регистрирующей системы для микроплашек при 570 или 620 нм с длиной волны сравнения 690 нм.

Восстановленный конъюгат имеет красную окраску. Добавление конъюгата можно подтвердить с помощью регистрирующей системы для микроплашек при 490 нм с длиной волны сравнения 690 нм.

Раствор субстрата сначала бледно-желтого цвета, в ячейках с реактивными образцами он становится сине-зеленым. После добавления стоп-раствора в ячейках с реактивными образцами цвет из сине-зеленого становится оранжевым, в то время как в ячейках с нереактивными образцами – розовым. Добавление раствора субстрата можно подтвердить с помощью регистрирующей системы для микроплашек при 490 нм (без сравнения).
Полуавтоматический анализ

Этап 1	Восстановите и перемешайте конъюгат, приготовьте раствор субстрата и промывочную жидкость.
Этап 2	Используйте только необходимое для анализа количество ячеек. Не касайтесь верхушек и дна ячеек.
Этап 3	Внесите 25 мкл разбавителя образца в каждую ячейку.	25 мкл
Этап 4	Добавьте по 100 мкл образца или контроля в ячейки. В каждой плашке используйте первый ряд ячеек для анализа контролей. Контроли вносите в обозначенные ячейки после добавления образцов. Внесите по 100 мкл отрицательного контроля в каждую из 3 ячеек А1-С1 и по 100 мкл положительных контролей р24, анти-ВИЧ-1 и анти-ВИЧ-2 в ячейки D1-F1, соответственно. Используйте белый фон для визуального контроля за внесением образцов.	100 мкл
Этап 5	Закройте ячейки крышкой и инкубируйте в течение 60 минут при температуре 371°С.	60 мин
Этап 6	После завершения инкубации промойте плашку, как описано в разделе Процедура промывания.
Этап 7	Сразу после промывания плашки в каждую ячейку добавьте 100 мкл конъюгата.	100 мкл
Этап 8	Закройте ячейки крышкой и инкубируйте в течение 30 минут при температуре 371°С.	30 мин
Этап 9	После завершения инкубации промойте плашку, как описано в разделе Процедура промывания.
Этап 10	Сразу после промывания плашки в каждую ячейку добавьте 100 мкл раствора субстрата.	100 мкл
Этап 11	Закройте ячейки крышкой и инкубируйте в течение 30 минут при температуре 371°С. Не допускайте попадания прямых солнечных лучей. В ячейках с реактивными образцами появится сине-зеленое окрашивание.	30 мин
Этап 12	В каждую ячейку добавьте 50 мкл стоп-раствора (серная кислота, от 0,5М до 2М).	50 мкл
Этап 13	В течение 15 минут анализируйте оптическую плотность при 450 нм, с длиной волны сравнения 620-690 нм, если возможно. Проведите холостую пробу по воздуху (без плашки).	А₄₅₀

Процедуры промывания

Протоколы по рекомендуемым системам для промывания и процедур проверки этих систем и анализаторов можно получить у местного представителя.

Рекомендуется следовать следующему протоколу:

а) Протокол автоматического промывания

Проведите 5 циклов промывания с помощью промывочной жидкости рабочей концентрации. По возможности убедитесь, что:

Общий объем жидкости в каждой ячейке составляет 500 мкл, при использовании аппаратуры Abbott. При использовании другой аппаратуры проверьте, чтобы ячейка была полностью наполнена.
Уровень наполнения установлен так, чтобы ячейка полностью наполнялась (со слегка положительным мениском), но не переполнялась.
Для проведения одного полного цикла аспирации/промывания/замачивания требуется приблизительно 30 секунд.
В ячейке не осталось жидкости (по возможности дважды повторяйте этап аспирации в последнем цикле).
После завершения промывания переверните плашку и постучите по поверхности, покрытой абсорбирующей бумагой, чтобы удалить остатки промывочной жидкости.

Примечание: Во время процедуры анализа не допускайте высыхания ячеек.

Во избежание засорения и появления ржавчины в конце каждого теста промывайте промывочное устройство дистиллированной или деионизированной водой.

Полностью автоматические анализаторы для микроплашек

Существуют утвержденные протоколы для различных автоматических анализаторов, спрашивайте их у местного представителя. Работу без утвержденного протокола рекомендуется проводить в соответствии со следующими правилами:

Не устанавливайте время анализа меньше, чем указано в процедуре.
Увеличивать установленную длительность инкубации при 37С можно не более чем на 5 мин.
Ячейки с разбавителем образца можно оставлять при 18-30С не более 60 минут перед внесением образца и не более 15 минут после добавления образца или контроля перед началом проведения 5 этапа.

Результаты

расчет результатов

Расчет и интерпретация результатов в каждой плашке производится отдельно.

Для расчета и интерпретации результатов можно использовать утвержденные компьютерные программы.

Отрицательный контроль
Murex HIV Ag/Ab Combination
Рассчитайте среднюю оптическую плотность отрицательного контроля.

Пример:

Ячейка 1 = 0,084, ячейка 2 = 0,086, ячейка 3 = 0,070

Общее значение = 0,240

Среднее значение отрицательного контроля = 0,240/3 = 0,080
Если в одной из ячеек с отрицательным контролем оптическая плотность превышает среднее значение (по трем ячейкам) более чем на 0,15 ед., пересчитайте среднее значение по двум оставшимся ячейкам, не учитывая значение в этой ячейке.
Пороговое значение

Рассчитайте пороговое значение, прибавив 0,150 к среднему значению отрицательного контроля (см. выше).

Среднее значение отрицательного контроля = 0,080

Пороговое значение = 0,080 + 0,150 = 0,230

Контроль качества

Результат анализа считается достоверным, если результаты анализа контролей соответствуют следующим критериям:

Отрицательный контроль

Средняя оптическая плотность должна быть меньше 0,15.

Положительные контроли

Оптическая плотность каждого положительного контроля должна превышать среднее значение отрицательного контроля больше чем на 0,8. Если результат не удовлетворяет критериям, анализ необходимо повторить.

Если результаты повторного анализа также не будут удовлетворять критериям контроля качества или ожидаемым характеристикам теста (что маловероятно), свяжитесь с местным торговым представителем.
Интерпретация результатов

Нереактивные результаты

Образцы с оптической плотностью меньше порогового значения расцениваются как отрицательные в данном анализе.

Реактивные результаты

Образцы с оптической плотностью, равной или превышающей пороговое значение, расцениваются как первично реактивные в данном анализе (см. раздел Ограничения процедуры).

Такие образцы должны быть протестированы еще раз в двух повторах (из той же пробы). Образцы, реактивные хотя бы в одном из повторных тестов, расцениваются как повторно реактивные в Murex HIV Ag/Ab Combination и предположительно содержащие ядерный антиген ВИЧ и/или антитела к ВИЧ-1 или ВИЧ-2. Такие образцы необходимо проанализировать с помощью других тестов. Нереактивные образцы, т.е. с оптической плотностью меньше порогового значения, расцениваются как нереактивные на ядерный антиген ВИЧ и/или антитела к ВИЧ.

Отсутствие образца в ячейке

Значения оптической плотности, значительно превышающие значения отрицательного контроля, могут быть получены в ячейках, в которых было пропущено внесение образца, а все реагенты были добавлены.

Характеристики анализа

Характеристики анализа Murex HIV Ag/Ab Combination оценивали с помощью анализа образцов доноров крови, пациентов с диагнозом СПИД (по критериям CDC), пациентов со СПИД-ассоциированным комплексом, пациентов с обнаруженными антителами к ВИЧ 1 (включая группу О), пациентов с подтвержденной инфекцией ВИЧ-2, пациентов с высоким риском ВИЧ-инфекции и других клинических категорий. Кроме того, анализ оценивали с помощью коммерческой панели сероконверсии.

Диагностическая чувствительность

С помощью анализа Murex HIV HIV Ag/Ab Combination было проанализировано 497 образцов пациентов с подтвержденной инфекцией ВИЧ-1. Все образцы оказались реактивными в данном тесте. Образцы были получены от пациентов с ВИЧ-инфекцией на разных стадиях, они включали 24 образца пациентов с инфекцией ВИЧ-1, подтипа О, и 139 образцов пациентов, инфицированных ВИЧ-1 других подтипов.

Кроме того, с помощью анализа Murex HIV HIV Ag/Ab Combination было проанализировано 100 образцов пациентов с подтвержденной инфекцией ВИЧ-2. Все образцы оказались реактивными в данном тесте.

Диагностическая чувствительность анализа Murex HIV Ag/Ab Combination на материале этих образцов, установленная с помощью биномиального распределения, составила 100% (597/597) с нижним пределом 95%-ного доверительного интервала 99,38% (593/597).

С помощью анализа Murex HIV Ag/Ab Combination было проанализировано 26 панелей сероконверсии ВИЧ-1. В качестве сравнительного критерия использовалось наличие в Вестерн-блоттинге двух полос – ядра (р24) и оболочки (gp 120/160). В анализе Murex HIV Ag/Ab Combination во всех панелях антитела к ВИЧ обнаруживались раньше или в том же образце, что и в Вестерн-блоттинге.
Диагностическая специфичность

При анализе образцов европейских доноров крови специфичность анализа Murex HIV Ag/Ab Combination составила ≥99,5%. С помощью анализа Murex HIV Ag/Ab Combination было проанализировано 9290 образцов доноров крови в трех европейских центрах переливания крови. Результаты суммированы в таблице 3. В данном исследовании 99,77% (9269/9290) образцов были нереактивными, 0,23% (21/9290) – повторно реактивными. Один из повторно реактивных образцов был слабо положительным в анализе Murex HIV Antigen Mab (8E77). Наличие антигена ВИЧ-1 или антител к ВИЧ-1 или ВИЧ 2 не было подтверждено ни в одном из оставшихся 20 повторно положительных образцов.
Специфичность анализа Murex HIV Ag/Ab Combination на материале предположительно отрицательных образцов европейских доноров крови, установленная с помощью биномиального распределения, составила 99,78% (9269/9289) с 95%-ным доверительным интервалом от 99,67% (9258/9289) до 99,86% (9276/9289).*
С помощью анализа Murex HIV Ag/Ab Combination протестировали 267 образцов пациентов с заболеваниями, не связанными с ВИЧ-инфекцией. Сюда включали образцы беременных, больных аутоиммунной патологией и другими острыми вирусными инфекциями. 5 образцов оказались реактивными в Murex HIV Ag/Ab Combination, 4 образца были реактивными в двух других коммерческих скрининговых анализах. В Вестерн-блоттинге 4 образца имели промежуточный результат, а 1 – отрицательный.

Кроме того, нереактивными в анализе HIV Ag/Ab Combination оказалось 38 образцов с гемолизом, повышенным содержанием липидов и билирубина.

Таким образом, в этом исследовании общая диагностическая специфичность анализа на материале подтверждено отрицательных образцов составила 99,78% (9569/9590), с 95% ным доверительным интервалом от 99,67% (9558/9590) до 99,87% (9576/9590).
* Представлены репрезентативные данные. Результаты других лабораторий могут отличаться.

Воспроизводимость анализа

Воспроизводимость анализа Murex HIV Ag/Ab Combination оценивали с помощью анализа двух контролей и четырех панелей контроля качества (QA) в 10 повторах 4-кратно. Результаты этого исследования суммированы в таблице 4.
Таблица 3

Реактивность анализа Murex HIV Ag/Ab Combination на материале предположительно отрицательных образцов европейских доноров крови

Центр

Кол-во предпол. отрицательных образцов

Кол-во повторно реактивных образцов

3095

2803

3392

6^а (0,19%)

9 (0,32%)

6 (0,18%)

Всего

9290

21 (0,23%)

^аВключая 1 образец, который был слабо положительным в Murex HIV Antigen Mab (8E77).
Таблица 4

Воспроизводимость анализа Murex HIV Ag/Ab Combination

Образец	Кол-во анализов	Кол-во повторов	Среднее значение оптической плотности/пороговое значение	%CV внутри запуска	%CV между запусками
Отрицат. контроль	4	10	0,266	8,7	11,3
Положит. Контроль ВИЧ-1	4	10	8,287	4,3	4,7
QA 01	4	10	3,672	4,6	7,3
QA 02	4	10	4,696	5,6	12,9
QA 03	4	10	3,006	3,9	4,2
QA 04	4	10	1,663	6,8	9,2

Чувствительность на стандарте AFSSAPS HIV Ag

Чувствительность анализа Murex HIV Ag/Ab Combination на стандарте AFSSAPS HIV Ag исследовали в трех лабораториях.

Таблица 5

Чувствительность на стандарте AFSSAPS HIV Ag

Центр

Антиген HIV, пг/мл

Среднее значение

Данные таблицы 5, полученные в этом исследовании, могут не быть точно воспроизводимы в других исследованиях.

Ограничения процедуры

Соблюдайте этапы, описанные в разделах Процедура анализа и Интерпретация результатов.
Методика предназначена только для анализа отдельно взятых (не объединенных) образцов сыворотки крови или плазмы крови с ЭДТА или цитратом.
Отрицательный результат анализа на антиген/антитела не исключает наличия ВИЧ-инфекции.
Положительный результат в анализе Murex HIV Ag/Ab Combination должен быть подтвержден с помощью по крайней мере еще одной методики.
Результаты некоторых образцов, содержащих антитела к ВИЧ-2, могут быть заниженными.
При использовании любых иммуноферментных анализов возможно

Murex HIV Ag/Ab Combination
получение однократно реактивных результатов.
Самые частые причины получения ошибочных результатов анализа:

Внесение в ячейку неправильного количества образца, конъюгата или субстрата.
Попадание конъюгата в субстрат.
Попадание конъюгатов из других анализов.
Полная или частичная закупорка промывочных зондов.
Недостаточная аспирация, приводящая к тому, что в ячейке остается небольшое количество промывочной жидкости.
Отсутствие проверки того, чтобы дно ячейки было чистым и сухим, а на поверхности жидкости в ячейке перед считыванием результата в плашке отсутствовали пузырьки воздуха.
Неправильно выбрана длина волны для анализа (450 нм) или длина волны сравнения (620-690 нм).

Использование образцов с выраженным гемолизом или значимой микробной контаминацией, сыворотки с неполным свертыванием крови, а также плазмы с фибрином может привести к получению неправильных результатов анализа.
Возможность анализа с помощью этой методики образцов трупной крови не оценивалась.

Компонент	Реактивен на	Не реактивен на
Отрицательный контроль	Н/Р	HBsAg Антитела к HCV, ВИЧ-1 и ВИЧ-2
Положительный контроль 1	Антитела к ВИЧ-1	HBsAg Антитела к HCV
Положительный контроль 2	Антитела к ВИЧ-2	HBsAg Антитела к HCV