гематологического и биохимического исследования с данными для оценки их результатов,
необходимые при проведении предварительных при поступлении на работу и периодических
медицинских осмотров рабочих с вредными условиями труда.
осмотрам и наблюдению профпатологов, рассеяны по ряду руководств, монографий, журналов, и
поэтому пользование ими в практике лабораторных работников периферических поликлиник и
медсанчастей затруднено. Вместе с тем нужда хотя бы в краткой сводке таких методов велика. В
методик, часть из которых разработаны или модифицированы в лаборатории Ленинградского НИИ
гигиены труда и профессиональных заболеваний, другие заимствованы из различных источников и
хорошо зарекомендовали себя в практике нашей и других лабораторий. Опыт показал, что
чувствительность, точность и воспроизводимость рекомендуемых методов достаточны для решения
большинства вопросов, возникающих в повседневной практике профпатологов.
ряд специальных гематологических и биохимических анализов.
хронических отравлениях бензолом, веществами бензольного ряда, свинцом, гемическими ядами и
при воздействии ряда факторов физической природы могут являться ведущими симптомами
заболевания, гематологическое исследование имеет важное значение.
характером, структурой и степенью воздействия этиологического фактора. Однако в ряде случаев
можно наблюдать однотипные изменения при воздействии различных токсических веществ и,
наоборот, значительную вариабельность их при действии одного и того же фактора.
исследований необходимо учитывать условия, которые могут повлиять на результаты. Рекомендуется
проводить все исследования утром натощак, т.к. известно, что в течение суток возможны колебания
показателей морфологического и биохимического состава крови, часть из которых связана с
приемами пищи.
При оценке результатов исследования крови следует использовать
сопоставление с нормой, выработанной на основании обследования
контингентов здоровых людей. Оценку степени отклонений показателей
отдельных лиц проводят в сопоставлении с величинами, ограниченными
_
интервалом х +/- 1,5 сигмы контрольной группы (нормы). Для
выяснения общей направленности изменений крови в группе
обследуемых рабочих следует сопоставлять средние величины
изучаемых показателей обследуемой и контрольной группы.
Важным условием совершенствования практики лабораторных исследований,
обеспечивающими возможность сопоставления результатов повторных осмотров и данных,
полученных разными лабораториями, является использование унифицированных методик.
Обследование больших контингентов рабочих требует повышения производительности труда
работников лабораторий за счет внедрения автоматических и полуавтоматических приборов и
устройств. Для ускорения подсчета форменных элементов крови хорошо зарекомендовали себя ФЭК-
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
М или ФЭКН-57, целлоскопы и другие счетчики. При систематической торировке (не реже 1 раза в 2
- 3 месяца) хорошо воспроизводимые результаты дают и эритрогемометры. Пробирочный метод
счета форменных элементов крови по Н.М. Николаеву также значительно сокращает затраты времени
на исследования.
крови от механической защиты и образования первичного тромба на месте повреждения сосудистой
стенки до выделения при их распаде прокоагулянтов, ретрактильных веществ и участия в процессах
регулирования тонуса и проницаемости сосудов. Значительное снижение количества тромбоцитов
имеет самостоятельное значение в происхождении некоторых форм геморрагических диатезов.
Однако явления кровоточивости могут возникать и при нормальном или повышенном количестве
тромбоцитов вследствие нарушения их функционального состояния.
Среди известных методов подсчета тромбоцитов принципиально различаются две группы:
подсчет в мазках (метод Фонио) и подсчет в камере Горяева. В связи с распространением
автоматических счетчиков форменных элементов крови определенное значение приобрел метод
подсчета тромбоцитов при помощи приборов типа "Целлоскоп" и других. Величина погрешности при
использовании большинства общепринятых методов велика и составляет 20 - 30% (О.Н. Пиксанов и
В.П. Щенникова). Более точными и воспроизводимыми являются камерные методы; при
автоматическом подсчете эритроцитов более удобным является метод Фонио.
Подсчет тромбоцитов по Фонио
Реактивы. Стерильный раствор сульфата магния 14%. Фиксаторы Лейшмана или Май-
Грюнвальд; краситель Романовского - Гимзы.
раствора сульфата магния, смешивают с ней каплю крови из пальца, из смеси готовят мазки,
высушивают и окрашивают по Паппенгейму.
Подсчет тромбоцитов. В окрашенном мазке сосчитывают 1000
эритроцитов и все встретившиеся при этом тромбоциты. Таким образом
получают относительное число, выражаемое промилле (промилле). Для
вычисления абсолютного количества тромбоцитов эту величину следует
умножить на количество эритроцитов в 1 мкл и разделить на 1000.
Пример: в мазках найдено 64 промилле тромбоцитов; количество
6
эритроцитов у пациента составляет 3,5 x 10 в 1 мкл;
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
отсюда число тромбоцитов в 1 мкл будет равно
6
64 x 3,5 x 10 3
-------------- = 224 x 10 в 1 мкл.
1000
Подсчет тромбоцитов в камере
(модификация И.И. Данилина)
Реактивы. 3,5% раствор цитрата натрия. Фурациллин. Разводящая жидкость готовится из
расчета 0,025 г фурациллина на 100 мл 3,5% раствора цитрата натрия. Введение фурациллина
позволяет готовить разводящую жидкость на длительное время: 1 - 2 месяца, при условии хранения в
холодильнике.
разводящую жидкость - цитратно-фурациллиновую смесь - до метки 101. Подсчет ведется в 5 или 10
средних квадратах камеры Горяева, аналогично подсчету эритроцитов. Результат в абсолютных
цифрах получают умножением числа тромбоцитов, найденных в камере, на 10000 или 5000.
растворе хлорида натрия (1 г красителя на 100 мл раствора NaCl). Растворение идет медленно, в
тепле; к употреблению краситель готов не ранее, чем через сутки после приготовления.
Приготовление препарата. Капилляром Панченкова в небольшую пробирку вносят 15 мм
красителя и 20 - <...> мм крови из пальца, перемешивают и оставляют на 30 мин. при комнатной
температуре (время инкубации можно увеличить до 2-х часов). Из смеси готовят мазки на
обезжиренных предметных стеклах.
микроскопа вкладывают диафрагму из черной бумаги с окном 4 x 4 мм. Дополнительной окраски
препараты не требуют. После обнаружения первого ретикулоцита в мазке сосчитывают 1000
эритроцитов и все встретившиеся при этом ретикулоциты. Результат выражают в процентах или
промилле.
Норма. У здоровых людей количество ретикулоцитов колеблется от 4 до 12 промилле.
Эритроциты с базофильной зернистостью
В отличие от включений, окрашиваемых суправитально в ретикулоцитах, в отдельных
эритроцитах может обнаруживаться зернистость, выявляемая после фиксации мазка крови. Считают,
что эта зернистость также свойственна молодым эритроцитам, но в условиях патологии, поскольку
она встречается при различных формах анемии. Большое количество базофильно-зернистых
эритроцитов находят при хронической интоксикации свинцом и его неорганическими
соединениями. При этом профессиональном заболевании оценка количества базофильно-зернистых
(гемические яды, бензол, сероуглерод) базофильно-зернистые эритроциты могут обнаруживаться,
хотя и реже, чем при сатурнизме.
Окраска эритроцитов с базофильной зернистостью
Реактивы. Этанол 96°. Основной раствор красителя: 1% водный раствор метиленового синего.
Рабочий раствор готовят перед употреблением из основного (2 капли на 1 мл воды с нейтральной
реакцией).
Подсчет эритроцитов с базофильной зернистостью
в "темном поле"
Подсчет эритроцитов с базофильной зернистостью в проходящем свете (обычная микроскопия),
широко используемый в практике, имеет ряд существенных недостатков, главные из которых его
трудоемкость и связанная с ней низкая воспроизводимость и сходимость результатов. Значительные
преимущества метода темного поля позволяют рекомендовать последний для использования в
лабораториях, проводящих исследования крови у лиц, контактирующих со свинцом. Эффект темного
поля достигается путем замены обычного конденсора на "темнопольный" (выпускается ЛОМО, ОИ-
13); при этом необходимо иметь осветитель с ирисной диафрагмой (типа ОИ-19 или ОИ-31) и
отдельный микроскоп. В иммерсионный объектив вкладывают конусную диафрагму, имеющуюся в
комплекте ОИ-13. При работе с современными микроскопами (МБИ, БИОЛАМ) для достижения
эффекта темного поля следует удалить винт-ограничитель, расположенный на кремальере конденсора
(под предметным столиком). Необходимы тонкие предметные стекла для мазков (не более 1 мм в
толщину).
наносят каплю иммерсионного масла. Устанавливают предметное стекло на столик микроскопа.
пучок света на плоскую сторону зеркала так, чтобы на нем появилось изображение нити накала
лампы осветителя. Передвигая патрон лампы по продольной оси, добиваются максимальной
резкости этого изображения. Для контроля можно положить на зеркало белую или папиросную
бумагу.
5. Под визуальным контролем движениями зеркала направляют изображение нити лампы на
нижнее отверстие конденсора (наблюдать при помощи простого зеркала, положенного на подставку
микроскопа).
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
6. Приоткрывают диафрагму осветителя. При этом в поле зрения появляется светлое кольцо.
7. Фокусируют тубус микроскопа на препарат; устанавливают освещенное кольцо в центр поля
зрения (при помощи центрировочных винтов конденсора); движениями конденсора вверх-вниз
добиваются появления в центре поля зрения светящегося пятна на месте кольца.
8. Наносят каплю иммерсионного масла на лицевую сторону препарата и переходят к
наблюдению с иммерсионным объективом. При этом в поле зрения должны быть хорошо видны
светящиеся контуры эритроцитов. Базофильная зернистость выглядит в виде светящихся зерен,
покрывающих весь эритроцит и не выходящих за его пределы. Характер зерен от пылевидных до
грубых оскольчатых.
Подсчет. После того как найден первый базофильно-зернистый эритроцит, просматривают 40
полей зрения и подсчитывают все встретившиеся эритроциты с базофильной зернистостью (считать
все эритроциты не нужно). Ответ дается в количестве базофильно-зернистых эритроцитов на 10000
(40 полей зрения по 250 эритроцитов в среднем) или в пересчете на миллион эритроцитов, для чего
полученную цифру следует умножить на 100.
Норма и оценка результатов. У здоровых людей, не подвергающихся воздействию свинца и
других токсических веществ, количество базофильно-зернистых эритроцитов не превышает 1000 на
миллион. Для интоксикации свинцом характерны цифры 2000 и выше. При обнаружении
базофильно-зернистых эритроцитов в количестве от 1000 до 1900 рекомендуется привлекать
результаты повторных исследований и данные других лабораторных и клинических исследований.
Тельца Гейнца
Тельца Гейнца - округлые глыбкообразные образования в эритроцитах, расположенные обычно
по краю и обнаруживаемые при суправитальной окраске интактных клеток или мазков крови
метиловым фиолетовым, сульфатом нильского синего или блестящим крезиловым синим.
Образование телец Гейнца связано с глубокими дегенеративными изменениями в цитоплазме
эритроцитов, повреждением молекул гемоглобина и, в частности, денатурацией отщепившегося от
них глобина; их наличие свидетельствует о глубоких функциональных нарушениях этих клеток.
Обнаруживаются тельца Гейнца при воздействии ряда веществ - метгемоглобинобразователей.
Исчезновение этих телец вместе с содержащими их эритроцитами происходит через несколько дней
после прекращения контакта с токсическим агентом.
Окраска телец Гейнца
Реактивы. 1 г метилового фиолетового (или другого из перечисленных выше красителей)
растворяют в 100 мл 0,6% раствора натрия хлорида.
добавляют каплю красителя. Соединенные капли перемешивают, покрывают покровным стеклом и
помещают во влажную камеру на 1 - 3 часа при комнатной температуре. Микроскопируют с
иммерсионным объективом.
При интоксикациях метгемоглобинобразователями почти в каждом поле зрения и в каждом
эритроците обнаруживается 1 - 3 тельца диаметром от 0,5 до 1,5 мкм.
Гемоглобин и его производные
Гемоглобин (Hb) - заключенный в эритроцитах дыхательный
пигмент, обеспечивающий транспорт кислорода из легких в ткани и
участвующий в переносе углекислоты из тканей в легкие. Hb является
белком из группы хромопротеидов (металлопротеидов). Непременным
условием нормального функционирования Hb является пребывание в его
++
молекуле железа в двухвалентной форме (Fe ). Все производные Hb
обладают характерными спектрами поглощения, измерение которых
лежит в основе количественного определения их соотношений.
Основной особенностью Hb является способность образовывать
рыхлое, легко диссоциирующее соединение с кислородом, т.е.
переходить в оксигенированное состояние - оксигемоглобин (HbO ).
2
Карбоксигемоглобин (COHb). Помимо кислорода гемоглобин способен связывать ряд других
газов и соединений, из которых в клинической токсикологии наибольшее значение имеет окись
углерода (угарный газ, CO). Образующееся при этом соединение - карбоксигемоглобин - подчиняется
тем же закономерностям образования и диссоциации, что и оксигемоглобин. Различие состоит в
скоростях указанных процессов, и в первую очередь в скорости диссоциации. Результатом этого
различия является более высокое сродство гемоглобина к окиси углерода, чем к кислороду (в 200 -
300 раз). Связанный с CO гемоглобин не может присоединять и транспортировать кислород, поэтому
количество переносимого кровью кислорода уменьшается пропорционально
карбоксигемоглобинемии. Развивается гипоксия. В присутствии COHb затрудняется диссоциация и
молекул оксигемоглобина. Этим свойством COHb в значительной степени объясняются токсичность
окиси углерода и эффективность кислородной терапии при отравлениях ею.
Определение содержания карбоксигемоглобина
в крови (Л.Э. Горн)
Метод основан на фотометрическом определении разницы
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
светопоглощения растворов HbO и COHb после денатурации их
2
щелочью.
Оборудование и реактивы. Универсальный фотометр ФМ (или
горизонтальный). Раствор аммиака 0,04%. Растворы едкого калия и
натрия 0,2 н.
Определение. В две пробирки наливают по 4,9 и 5,9 мл 0,04%
раствора аммиака, после чего в каждую из них вносят по 0,1 мл
крови. В первую пробирку, предназначенную для определения
светопоглощения исходной денатурированной крови, содержащей
искомое количество COHb и HbO , быстро добавляют 5 мл раствора
2
щелочи, быстро перемешивают пробу двукратным опрокидыванием на
пробку и фотометрируют через минуту после внесения щелочи (50 - 70
сек., не более!) при светофильтре N 5 (М-55 или М-52, эффективная
длина волны пропускаемого света 550 или 520 ммк). Содержимое
второй пробирки, в которой определяют общее количество
гемоглобина, прямо фотометрируют при светофильтре N 6 (М-50, 496
ммкм). Фотометрирование ведется по общепринятым правилам в кюветах
10 мм против дистиллированной воды.
При использовании светофильтра N 5 (М-55) содержание COHb
вычисляют по формуле:
E денатурированного HbO + COHb
2
% COHb = 132 x ------------------------------- - 81.
E общего Hb
Если светофильтр имеет марку М-52, а не М-55, то коэффициент
132 заменяется на 123.
Пример расчета. Среднее из пяти отсчетов значение величины E
денатурированного HbO + COHb равно 0,46: E общего Hb = 0,70;
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
2
132 x 0,46
% COHb = ---------- - 81 = 132 x 0,66 - 81 = 6%.
0,70
Методические замечания. Предлагаемый метод сравнительно прост, быстр и не нуждается в
использовании дефицитных приборов. При хранении проб в темноте, в закрытых пробирках,
фотометрирование без ущерба для точности результата может быть проведено через несколько часов
после взятия крови. Приведенная формула применима только при фотометрировании на указанных
приборах. Использование фотоэлектроколориметров из-за широкополосности находящихся в них
светофильтров не рекомендуется, т.к. чувствительность метода при этом падает в 2 - 3 раза, а ошибка
определения соответственно возрастает. Определение COHb может проводиться также по одному из
вариантов спектрофотометрического метода.
углерода, некоторое количество COHb присутствует и обусловлено практически постоянным
загрязнением атмосферы продуктами неполного сгорания всех видов топлива. По данным ЛНИИ
гигиены труда и профессиональных заболеваний у городских жителей, не связанных с воздействием
CO на производстве, в крови содержится 2 - 15%, а по указаниям П.А. Розенберг и Н.П. Бялко - 0 -
12% COHb. Средняя концентрация COHb в крови колеблется, по различным данным, от 2 - 4 до 6 -
8%. Источником для образования COHb является не только экзогенная окись углерода, но и, в какой-
то степени, окись углерода, образующаяся в результате неполного окисления ряда продуктов обмена в
организме, в частности самого гемоглобина.
Установлено, что легкой форме острой интоксикации окисью углерода соответствует в среднем
20%, средней - 30% и тяжелой - 35 - 50% COHb. Отравление, при котором содержание COHb
превышает 50%, заканчивается обычно смертью.
При вынесении пострадавшего в чистую атмосферу и при вдыхании кислорода диссоциация
COHb протекает сравнительно быстро (за первый час концентрация COHb уменьшается вдвое),
поэтому результаты лабораторного исследования крови, взятой после оказания пострадавшему
первой помощи, могут дать искаженное представление о начальной максимальной концентрации
COHb, и тем самым - клинической тяжести интоксикации. В связи с этим необходимо максимально
сокращать интервал между оказанием первой помощи и взятием крови для определения COHb.
значительно уменьшается.
ферментных и неферментных систем происходит спонтанное восстановление гемоглобина. Оно
осуществляется в присутствии глюкозы, глутатиона, молочной пировиноградной и аскорбиновой
кислот, ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, метгемоглобинредуктазы и др. Непрерывное
функционирование этой системы объясняется тем, что из кишечника и тканей в кровоток постоянно
поступают различные продукты обмена, способные вызывать образование MtHb. Не менее
существенно прямое окисляющее действие самого кислорода. При выпадении какого-либо из звеньев
восстанавливающей системы (эссенциальная метгемоглобинемия) в крови в остальном вполне
здоровых людей может присутствовать MtHb в количестве до 40%. Другой, так же редко
встречающейся причиной метгемоглобинемии является наличие в крови гемоглобина M.
14 12 2014
3 стр.
02 10 2014
1 стр.
16 12 2014
1 стр.
13 09 2014
7 стр.
03 09 2014
1 стр.
11 10 2014
3 стр.
14 10 2014
1 стр.
06 10 2014
1 стр.