ФИБРИНОГЕН-ТЕСТ

Набор реагентов для определения содержания фибриногена в плазме человека по методу Клаусcа

Определение содержания фибриногена в плазме крови человека является одним из четырех базовых тестов. Измерения содержания фибриногена в плазме проводят при гиперфибриногенемии, которая связанна с тяжестью воспалительных, имунных, деструктивных процессов, а также является одним из факторов повышенного риска развития гипервискозного синдрома, артериальных тромбозов и инфарктов органов. Снижение концентрации фибриногена наблюдается при остром ДВС-синдроме, при лечении фибринолитиками, при врожденных гипо- и дисфибриногенемиях.

Принцип метода.

Определение содержания фибриногена основано на измерении времени свертывания разведенной плазмы избытком тромбина. В этом случае время свертывания зависит только от концентрации фибриногена в плазме. Концентрацию фибриногена определяют по калибровочной прямой, используя плазму с известным содержанием фибриногена.

Состав набора.

1. Тромбин для определения фибриногена (2 мл) - 8 флаконов,

2. Плазма-калибратор (1мл) - 1 флакон,

3. Буфер имидазоловый концентрированный (5 мл) - 1 флакон.

Приготовление реагентов.

1. Рабочий буферный раствор. Буфер имидазоловый концентрированный (5 мл) перелить в мерную колбу вместимостью 100 мл и долить до метки дистиллированной водой (разведение в 20 раз), тщательно перемешать. Рабочий буферный раствор хранить при температуре +2-8 ⁰ С не более 1 месяца.

2. Тромбин для определения фибриногена. Тромбин человека, лиофильно высушенный с активностью около 50 МЕ/мл. Внести во флакон с лиофильно высушенным тромбином 2 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при острожном покачивании. Реагент готов к проведению анализа через 20 минут после разведения.

3. Раствор плазмы-калибратора. Во флакон с плазмой-кали-братором внести 1 мл дистиллированной воды, растворить при осторожном покачивании. Раствор готов к проведению анализа через 20 минут после разведения.

Стабильность реагентов.

Реагенты	+2-80С	+18-220С	-18-200С
Тромбин для определения фибриногена	5 дней	2 дня	2 месяца
Раствор плазмы – калибратора	8 часов	4 часа	2 месяца

Чувствительность тромбина к гепарину.

В состав тромбина входит инактиватор гепарина, что позволяет использовать данный реагент для измерения содержания фибриногена в гепаринизированных образцах плазмы больных.

Получение исследуемой плазмы для анализа.

Венозную кровь взять в пластиковую или стеклянную силиконированную пробирку на 3,8% (0.11моль/л) цитрате натрия (9:1), центрифугировать 7 мин при 1000 об/мин, плазму перенести в другую пробирку и повторно центрифугировать 15 мин при 3000 об/мин. Центрифугирование следует проводить как можно скорее после взятия крови. Немедленно после центрифугирования перенести плазму в пластиковую пробирку. Для анализов достаточно 0,2 мл бедной тромбоцитами плазмы. Время хранения при комнатной температуре - не более 4 часов, при 2 - 8С не более 8 часов. Допускается однократное замораживание плазмы при температуре - 20⁰С.

Построение и использование калибровочного графика.

Использовать только пластиковые или силиконированные стеклянные пробирки. Приготовить следующие разведения плазмы-калибратора:

Пробирка, №	1	2	3	4
Содержание фибриногена в плазме-калибраторе, г/л	2А*	А	0,5А	0,25А
Рабочий буферный раствор, мл	0,8	0,5	0,5	0,5
Раствор плазмы-калибра-тора, мл	0,2	-	-	-
Перемешать и перенести в пробирку, мл	0,5 0,5 0,5

*А – содержание фибриногена в плазме-калибраторе, указанная в паспорте на набор.

Значения содержания фибриногена в г/л отложить на оси Х. На оси Y отложить значения времени свертывания каждого разведенного образца плазмы-калибратора в секундах. Через полученные точки провести калибровочный график, который в билогарифмических координатах должен представлять собой прямую линию. Линейность в диапазоне концентраций фибриногена от 0,6 - 1 до 5 – 6 г/л в зависимости от чувствительности коагулометра.

Проведение анализа.

Исследуемую плазму больного развести рабочим буферным раствором в 10 раз.

Внести в кювету анализатора:	Объем
Разведенная плазма-калибратор (исследуемая)	100мкл
Инкубировать при 37°С точно 2 минуты.
Тромбин для определения фибриногена	50 мкл
Зафиксировать время свертывания в секундах на коагулологическом анализаторе.

По калибровочному графику определить содержание фибриногена в плазме больного в г/л.

Интерпретация результатов.

В норме содержание фибриногена составляет 1,8 - 4г/л.

При анализе плазмы пациентов с высоким (более 4 г/л) содержанием фибриногена развести плазму в 20 раз, а полученное по графику значение умножить на 2. Если содержание фибриногена в плазме больного около 1 г/л, для уточнения полученного результата необходимо развести плазму в 5 раз и полученный результат разделить на 2.

Набор предназначен для всех типов коагулологических анализаторов, кроме тех, где используют суспензию каолина (необходимо обратить внимание на инструкцию, прилагаемую к коагулологическому анализатору). Кроме того, в инструкции к анализатору обратите внимание на чувствительность прибора к данному тесту.

Меры предосторожности.

Все компоненты данного набора предназначены только для диагностики in vitro. Компоненты набора следует рассматривать, как потенциально биологически опасные вещества, при работе с которыми необходимо соблюдать все меры предосторожности.

При работе с исследуемыми образцами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать вирусы иммунодефицита ВИЧ1 и ВИЧ2, гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Контроль качества.

Нормальные и патологические значения содержания фибриногена следует контролировать с помощью контрольных плазм НПО РЕНАМ:

Плазма контрольная на 4 параметра (Плазмы Н) код КМ-1

Плазма контрольная на 11 параметров код КМ-2

Плазмы контрольная патологическая на 4 параметра код КМ-3

Плазмы контрольная патологическая на 11 параметров код КМ-4