Каталожный номер: 30071 Фасовка: 20 тестов/упаковка

Справка

Ротавирус – РНК-содержащий вирус размером 65 нм, относящийся к семейству Reoviridae, является главной причиной инфекционного гастроэнтерита у детей младших возрастов; заболевание встречается также у детей более старших возрастов и взрослых. У пациентов из групп риска, таких как новорождённые, лица старческого возраста и пациенты с ослабленным иммунитетом, ротавирусный гастроэнтерит может привести к летальному исходу. В умеренном климате заболеваемость ротавирусной инфекцией приходится в основном на зимние месяцы. Описаны как эндемические очаги, так и эпидемические вспышки с несколькими тысячами заболевших. У детей, госпитализированных с острыми желудочно-кишечными расстройствами, анализы почти в 50% случаев показывают присутствие ротавируса. Ротавирусная инфекция легко передаётся фекально-оральным путём, поскольку вирус размножается в кишечнике и выделяется с калом. Тем самым, внутрибольничная ротавирусная инфекция, особенно в палатах для детей и новорождённых, представляет несомненную опасность, поскольку её ликвидация весьма затруднительна.

Принцип определения

В сравнении с трудоёмкими и требующими больших затрат времени классическими методами (электронной микроскопией и клеточной культурой), данный метод представляет собой простой и высокочувствительный качественный иммунохроматографический экспресс-тест для надёжного определения ротавируса в пробах кала. Метод определения основан на использовании конъюгированных с красителем мышиных моноклональных антител к ротавирусному антигену и иммобилизованных на мембране тестовой кассеты других поликлональных мышиных антител к вирусным антигенам для избирательного определения ротавируса в пробах кала с высокой степенью чувствительности и специфичности. При помещении пробы в пробирку с экстрагентом она растворяется, и несколько капель полученного экстракта вносятся в лунку для проб тестовой кассеты. При прохождении пробы через слой адсорбента меченый конъюгат антител с красителем связывается с антигеном ротавируса (если последний присутствует в пробе), образуя комплекс антиген–антитело. Этот комплекс связывается с поликлональными антителами в реакционной зоне тестовой кассеты, образуя пурпурно-розовую окрашенную полосу. В отсутствие антигена ротавируса полосы в реакционной зоне не образуется. Вне зависимости от результата теста несвязанный конъюгат, продолжая продвигаться по слою адсорбента, достигает контрольной зоны (C), где осаждается с образованием пурпурно-розовой контрольной полосы, подтверждающей качественность применяемых в тесте реагентов. Качественный результат теста считывается визуально или с помощью экспресс-анализатора «Easy Reader».

Состав

Тестовые кассеты 20

Одноразовые пластмассовые пипетки 20

Пластмассовые пробирки с 2 мл экстрагента 20

Аппликаторы для отбора проб 20

Инструкция 1

Стабильность и хранение

1. Хранить при температуре от 4 до 30°C в герметично закупоренной фабричной упаковке.

2. Не замораживать!

3. Тест стабилен до истечения срока хранения, указанного на этикетке.

Меры предосторожности

Данный тест предназначен только для диагностики in vitro и профессионального применения.

При работе с пробами пользоваться защитной одеждой и одноразовыми перчатками.

Не принимать пищу, не пить и не курить в помещении, где выполняется работа с пробами.

При взятии и тестировании проб не прикасаться руками к слизистой оболочке глаз и носа.

Внимательно прочитать инструкцию перед проведением теста.

Не использовать тестовую кассету, если её защитная упаковка повреждена.

Не использовать тестовую кассету с истекшим сроком хранения.

Обезвреживание отходов

Все пробы следует считать потенциально инфекционными. После завершения процедуры тестирования утилизировать пробы следует с осторожностью и только после стерилизации в автоклаве или обработки 0,5 – 1% раствором гипохлорита натрия не менее 1 часа.

Подготовка реагента

Все реагенты готовы к использованию.

Исследуемые образцы

Экстракт фекалий.

Взятие и подготовка проб

Предварительные замечания:

Пробы кала следует брать как можно скорее после появления симптомов заболевания. Было отмечено, что количество вирусных частиц в фекалиях достигает максимума через 3–5 дней после появления симптомов. Пробы, взятые на 8-й и последующие дни болезни, могут не содержать ротавирус в определяемом тестом количестве. Разведённые пробы могут храниться при 2–8°C в течение 3 суток без потери качества анализа. Для длительного хранения неразведённых проб рекомендуется заморозить их при температуре –20°C или ниже. Оттаивание и повторное замораживание проб крайне нежелательно, поскольку может привести к неверным результатам.

Внимание! Не отбирать пробы в контейнеры, содержащие питательные среды, консерванты, сыворотку животных или детергенты. Все эти вещества могут влиять на результаты анализов.

Процедура подготовки проб:

1. Пометить пластмассовую пробирку с экстрагентом фамилией или кодом пациента.

2. Открыть пробирку и внести в неё с помощью аппликатора пробу кала размером с горошину. Если стул жидкий, внести в пробирку 200 мкл кала.

3. Плотно закрыть пробирку крышкой и, встряхивая её, перемешать содержимое до полного растворения пробы в экстрагенте.

4. Дать пробирке отстояться в течение времени, достаточного для осаждения крупных частиц, или же отцентрифугировать пробирку в течение 1 минуты при 500 – 1000 об/мин.

Процедура тестирования

1. Довести все реагенты и пробы до комнатной температуры.

2. Извлечь тестовую кассету из защитной упаковки.

3. Открыть пластмассовую пробирку с экстрагированной пробой.

4. С помощью пластмассовой пипетки внести полных 6 полных капель (200 мкл) экстрагированной пробы в лунку для проб тестовой кассеты, давая впитываться предыдущей капле.

5. Наблюдать результаты теста через 10 минут после внесения пробы.

Интерпретация результатов

Отрицательный: Появляется только одна цветная полоса в контрольной зоне (C); в тестовой зоне полоса не видна. Проба не содержит ротавируса.

Положительный: Кроме цветной полосы в контрольной зоне, появляется также вторая чётко различимая полоса в тестовой зоне. В пробе присутствует ротавирус в определяемом данным тестом количестве.

Неопределённый: Если в контрольной зоне не появилось чёткой цветной полосы, тест считается не прошедшим контроль качества. В этом случае рекомендуется повторить его, взяв новую тестовую кассету.

Характеристики теста

а) Чувствительность и специфичность

Положительные пробы:

30 проб кала были предварительно протестированы латексным тестом ROTALEX компании FUMOUZE и показали положительные результаты. При тестировании этих проб данным тестом в 100% случаев был получен чёткий положительный результат.

Отрицательные пробы:

40 проб кала были предварительно протестированы латексным тестом ROTALEX компании FUMOUZE и показали отрицательные результаты. При тестировании этих же проб в 100% случаев был получен отрицательный результат.

б) Перекрестная реактивность

Пробы кала, положительные по энтеровирусу или астровирусу, показали отрицательные результаты при их тестировании данным тестом. Концентрированные клеточные культуры аденовирусов также показали повторяющиеся отрицательные результаты при тестировании.

Ограничения метода

1. Тест разработан только для определения ротавируса в пробах кала.

2. Как и для других диагностических процедур, врач должен подтвердить результат теста другими методами диагностики.

3. Присутствие в пробах кала значительных количеств крови может в ряде случаев привести к ложным положительным результатам.

Литература

1. Kapi A.Z., H. W. Kim, R.G. Wyatt, W.L. Cline, J.O. Arrobio, C.D. Brandt, W. J. Rodriguez, D.A. Sack, R.M. Chanock, and R.H. Parrott. 1976. Human reovirus-like agent as the major pathogen associated with "winter" gastroenteritis in hospitalized infants and young children. N. Engl.j.Med. 294:965-972.

2. Wenman W.M., Hinde D, Feltham S. and Gurwith M. Rotavirus Infection in Adults. Results of a Prospective study . New England Journal of Medicine 301, 303-306 (1979).

3. Marrie T.J., Spencer H.S., Faulkner R.S., Ethier J and Young C.H. Rotavirus Infection in a Geriatric Population. Arch. Intern. Med. 142, 313-316.

4. Cubitt W.D.: Rotavirus Infection : An Unexpected Hazard in Units Caring for the Elderly. Geriatric Medicine Today 1,33-38 (1982).

5. Coulson B.S. and Holmes I.H. : An Improved Enzyme-Linked Immunoabsorbent Assay for the Detection of Rotavirus in Faeces of Neonates. J. Virol. Methods 8, 165-179 (1984).

6. Hung T., Wang Ch., Fang Z, Chou Z, Chang X, Liong X, Chen G., Yao H., Chaon T., Ye W., Den S. and Chang W. : Waterborne outbreak of Rotavirus Diarrhoea in Adults in China caused by a Novel Rotavirus. Lancet, 1139-1142 (1984).

7. Cukor G., Perron D.M., Hudson R. and Blacklow N. R.: Detection of Rotavirus in Human Stools by Using Monoclonal Antibody. J. Clin. Microl. 19, 888-892 (1984).

Соблюдать температуру хранения Читать инструкцию Не использовать повторно Только для in vitro диагностики