Белова 263-978-754

Приложение №7

Самостоятельная работа студентов.

Манипуляции:

1. 
   Приготовление рабочих растворов: раствор субстрата, буферный
   

раствор, раствор активатора, раствор аденозинтрифосфата, раствор реактива;

2. 
   Работа с термостатом;
   
3. 
   Работа с центрифугой;
   
4. 
   Работа с ФЭК;
   
5. 
   Определение количества КФК по формуле;
   
6. 
   Выписывать результат анализа на бланк;
   

Алгоритм работы с центрифугой:

1. 
   Ставим пробирки в гнезда (четное число, пробирка против пробирки);
   
2. 
   Закрываем;
   
3. 
   Включаем в сеть;
   
4. 
   Задаем режим;
   
5. 
   Нажимаем на кнопку «ВКЛ»
   

Алгоритмы работы с ФЭК:

1. 
   Готовим исследуемый раствор (опыт и контроль);
   
2. 
   Включаем в сеть и открываем для нагрева;
   
3. 
   Устанавливаем светофильтр;
   
4. 
   Наливаем в кюветы исследуемый материал;
   
5. 
   Ставим в кюветодержатель;
   
6. 
   Закрываем кюветодержатель;
   
7. 
   Проводим опыт;
   
8. 
   Записываем результат.
   

Алгоритм определения креатинфосфокеназы (КФК)

1. 
   Берут 4 центрифужные пробирки (А1,А2,А3,А4)
   
2. 
   В 1-ю пробирку наливают 0,5 мл раствора субстрата,0,2 мл раствора активатора и 0,05 мл сыворотки крови
   
3. 
   Во 2-ю пробирку наливают 0,5 мл буферного раствора, 0,05 мл сыворотки крови и 0,2 мл бидистилированной воды
   
4. 
   в 3-ю пробирку наливают 0,5 мл раствора субстрата, 0,05 мл реактива №1 и 0,2 мл бидистилированной воды
   
5. 
   В 4-ю пробирку наливают 0,5 мл буферного раствора и 0,25 мл бидистилированной воды
   
6. 
   Перемешивают и предварительно икубируют 5 минут при t=37
   
7. 
   Во все пробирки добавляют по 0,1 мл раствора АТФ
   
8. 
   Перемешивают и инкубируют 60 минут при t=37
   
9. 
   Во все пробирки добавляют по 0,3 мл реактива №4 (ТХУ кислота)
   
10. 
    Перемешивают и центрифугируют 5 минут при 3000 об/мин
    
11. 
    В чистые пробирки отмеряют по 0,6 мл надосадочной жидкости и 0,8 мл раствора реактива
    
12. 
    Перемешивают 5 минут
    
13. 
    Измеряют оптическую плотность всех растворов против воды:
    

А. ФЭК включают за 30 минут до исследования

Б. Длина волны 390-410 нм, кювета на 1 см

В. Промывают кюветы дистиллированной водой

Г. В одну кювету наливают воду

Д. В другую кювету поочередно наливают пробы и фотометрируют
Алгоритм определения лактадегидрогеназы (ЛДГ)

1. 
   Берем 5 химических пробирок (А1,А2,А3,А4,А5)
   
2. 
   В 1-ю пробирку наливают 0,2 мл реактива 3, 0,5 мл реактива 5 и 0,05 мл сыворотки крови
   
3. 
   Во 2-ю пробирку наливают 0,2 мл реактива 3,0 ,5 мл реактива 6 и 0,05 мл сыворотки крови
   
4. 
   в 3-ю пробирку наливают 0,2 мл реактива 3, 0,5 мл реактива 4 и 0,05 мл сыворотки крови
   
5. 
   В 4-ю пробирку наливают 0,2 мл реактива 3, 0,5 мл реактива 5 и 0,05 мл эталонного раствора
   
6. 
   В 5-ю пробирку наливают 0,2 мл реактива 3, 0,05 мл эталонного раствора
   
7. 
   Перемешивают и икубируют 10 минут при t=37
   
8. 
   Во все пробирки добавляют по 0,2 мл раствора НС1
   
9. 
   Перемешивают и икубируют 10 минут при t=37
   
10. 
    Во все пробирки добавляют по 3 мл раствора НС1
    
11. 
    Перемешивают и измеряют оптическую плотность растворов во всех 5-ти пробирках против воды:
    

А. ФЭК включают за 30 минут до исследования

Б. Длина волны 500-530 нм, кювета на 1 см

В. Промывают кюветы дистиллированной водой

Г. В одну кювету наливают воду

Д. В другую кювету поочередно наливают пробы и фотометрируют
Алгоритм определения щелочной фосфатазы (ЩФ)

1. 
   Берут химическую пробирку (опытная проба)
   
2. 
   Наливают 0,6 мл субстратно- буферного раствора
   
3. 
   Греют в течение 5-ти минут до t=37
   
4. 
   Добавляют 0,02 мл сыворотки крови
   
5. 
   Икубируют 10 минут при t=37
   
6. 
   Добавляют 0,6 мл окислительного раствора
   
7. 
   Через 5 минут определяют оптическую плотность:
   

А. ФЭК включают за 30 минут до исследования

Б. Длина волны 560нм, кювета на 1 см

В. Промывают кюветы дистиллированной водой

Г. В одну кювету наливают воду

Д. В другую кювету поочередно наливают пробы и фотометрируют

8. 
   Берут другую химическую пробирку холостая проба)
   
9. 
   Ставят как опытную пробу, но сыворотку добавляют перед фотометрированием
   

Алгоритм определения альфа- амилазы в моче.

1. 
   Берут 2 пробирки (опыт и контроль)
   
2. 
   Наливают в обе пробирки по 2 мл крахмального буфера
   
3. 
   Ставят на водяную баню на 5 минут при t=37
   
4. 
   НЕ вынимая пробирок, в 1-ю пробирку добавляют 0,1 мл разбавленной мочи (0,1 мл мочи +0,9 мл физиологического раствора)
   
5. 
   Ставят в термостата 6 минут при t=37
   
6. 
   Помещают в ледяную воду и добавляют 10 мл 0,1н НС1 ил 0,2 мл 0,01н раствора йода
   
7. 
   Перемешивают и измеряют оптическую плотность против воды:
   

А. ФЭК включают за 30 минут до исследования

Б. Длина волны 560нм, кювета на 1 см

В. Промывают кюветы дистиллированной водой

Г. В одну кювету наливают воду

Д. В другую кювету поочередно наливают пробы и фотометрируют
Алгоритм определения альфа- амилазы в сыворотке крови

1. 
   Берут 2 пробирки (опыт и контроль)
   
2. 
   Наливают в обе пробирки по 1 мл крахмального буфера
   
3. 
   Ставят па водяную баню на 5 минут при t=37
   
4. 
   Не вынимая пробирок, в 1-ю пробирку добавляют 0,01 мл сыворотки
   
5. 
   Ставят в термостат на 5 минут при t=37
   

6.Помещают в ледяную воду и добавляют 10 мл 0,1н НС1 иил 0,2 мл 0,01н раствора йода

7. Перемешивают и измеряют оптическую плотность против воды

Алгоритм определения гаммаглутаминтранспептидазы (ГГТ)

1. 
   Берут 2 химических пробирки (проба и контроль)
   
2. 
   Наливают в обе пробирки по 0,25 мл раствора субстрата
   
3. 
   Икубируют 5 минут при t=37
   
4. 
   В 1-ю пробирку добавляют 0,025 мл сыворотки крови
   
5. 
   Икубируют 15 минут при t=37
   
6. 
   Во 2-ю пробирку добавляют 1,5 мл 10% уксусной кислоты и 0,025 мл сыворотки крови
   
7. 
   Измеряют оптическую плотность пробы и контрольного раствора против воды:
   

А. ФЭК включают за 30 минут до исследования

Б. Длина волны 400-430нм, кювета на 1 см

В. Промывают кюветы дистиллированной водой

Г. В одну кювету наливают воду

Д. В другую кювету наливают сначала опыт, затем контроль и фотометрирую

Алгоритм определения кислой фосфатазы (КФ)

1. 
   Берут 4 химические пробирки(проба1, проба2, контроль, стандарт)
   
2. 
   В первые 3 пробирки наливают по 0,5 мл реактива2
   
3. 
   Во 2-ю пробирку наливают 0,2 мл реактива 3
   
4. 
   Икубируют 5 минут при t=37
   
5. 
   В 1-ю и 2-ю пробирки добавляют по 0,05 мл сыворотки крови
   
6. 
   Икубируют 30минут при t=37
   
7. 
   Во все пробирки добавляют по 2мг ингибитора
   
8. 
   В контроль добавляют 0,05 мл сыворотки крови
   
9. 
   В стандарт добавляют по 0,05 мл реактива 4
   
10. 
    Перемешивают 30 минут и измеряют оптическую плотность против воды:
    

А. ФЭК включают за 30 минут до исследования

Б. Длина волны 405-420нм, кювета на 1 см

В. Промывают кюветы дистиллированной водой

Г. В одну кювету наливают воду

Д. В другую кювету наливают сначала пробы, затем контроль и фотометрируют
Алгоритм определения аспартат -аминотрансферазы и аланин –аминотрансферазы (АсАТ и АлАТ)

1. 
   Берут 2 химических пробирки (опыт и контроль)
   
2. 
   В 1-ю пробирку наливают 0,025 мл реактива 4
   
3. 
   Во 2-ю пробирку наливают 0,25 мл реактива 4 и 0,05 мл физиологического раствора
   
4. 
   Икубируют 5 минут при t=37
   
5. 
   В 1-ю пробирку добавляют 0,05 сыворотки крови
   
6. 
   Икубируют 60минут при t=37
   
7. 
   В обе пробирки добавляют по 0,25 реактива2
   
8. 
   Перемешивают и оставляют стоять 20 минут при комнатной t
   
9. 
   В обе пробирки добавляют по 2,5 мл раствора NaOH
   
10. 
    Перемешивают и спустя 10 минут измеряют оптическую плотность:
    

А. ФЭК включают за 30 минут до исследования

Б. Длина волны 500-530нм, кювета на 1 см

В. Промывают кюветы дистиллированной водой

Г. В одну кювету наливают воду

Д. В другую кювету наливают сначала опыт, затем контроль и фотометрируют