В.И. Коржов, А.Н. Алфёров, В.Н. Жадан, М.В. Коржов, В.А. Вальтер (8 июня 2004). Функциональное состояние цитохром Р-450-оксигеназной системы микросом печени при экспериментальном пневмосклерозе и применении омега-3 полиненасыщенных жирных кислот [FTP архив]. URL ftp://ftp1.ifp.kiev.ua/original/2004/zip/korzhov2004-2.zip
УДК: 616.233-002-092.6/.9-02:547.586.2

В.И. Коржов, А.Н. Алфёров, В.Н. Жадан, М.В. Коржов, В.А. Вальтер

Функциональное состояние цитохром Р-450-оксигеназной системы микросом печени при экспериментальном пневмосклерозе и применении

омега-3 полиненасыщенных жирных кислот

Институт фтизиатрии и пульмонологии им. Ф.Г. Яновского АМН Украины

При остром и хроническом бронхитах нарушается функция оксигеназной системы микросом печени [ 5 ]. Однако вопрос о её состоянии при пневмосклерозе в литературе не освещён. Не изучено также и влияние на нее омега-3 полиненасыщенных жирных кислот (омега-3 ПНЖК).

Целью работы явилось изучение скорости окисления НАДН и НАДФН, а также содержания цитохромов Р-450 и b₅ в микросомах печени при экспериментальном пневмосклерозе и воздействии омега-3 ПНЖК.

В работе были использованы 60 половозрелых беспородных белых крыс массой 180-200 г, содержавшихся на стандартном рационе вивария. Животные были разделены на 6 групп: интактные; получавшие омега-3 ПНЖК; с пневмосклерозом; с пневмосклерозом, получавшие омега-3 ПНЖК с профилактической, лечебной и лечебно-профилактической целью.

Экспериментальную модель пневмосклероза у животных вызывали путём ингаляции аэрозоля солянокислого гистамина. Трижды с пятидневным интервалом животных помещали в специальную камеру, через которую пропускали аэрозоль солянокислого гистамина (100 гамм в 0,3 мл физраствора). Через 2 месяца у животных развивался пневмосклероз, который характеризовался фиброзной деструкцией бронхов и легких, склерозом бронхиальных стенок, спазмом легочных артерий и вен, эмфиземой легких, облитерацией бронхов и бронхиол [ 10 ].

Омега-3 ПНЖК ( препарат “ЭПАДОЛ” с содержанием омега-3 ПНЖК не менее 45 % ) в дозе 0,1 мл/кг массы тела вводили животным per-os ежедневно на протяжении одного месяца. При профилактическом и лечебном применении експериментальные животные суммарно получали 0,6 мл препарата, при лечебно-профилактическом – 1,2 мл.

Объектом исследования служили микросомы печени. Забор материала для исследований брали, соблюдая правила работы с экспериментальными животными [ 7 ]. Крыс забивали декапитацией. Микросомы выделяли на холоду при О ^оС методом дифференциального центрифугирования [ 8 ]. Белок определяли спектрофотометрически по Лоури и соавт. [ 1 ].

Скорость поглощения кислорода в микросомах изучали полярографическим методом с использованием вращающегося открытого платинового электрода [ 4 ]. Содержание цитохромов Р-450 и b₅ в микросомах определяли спектрофотометрически [ 2 ].

Полученные данные обрабатывали статистически [ 3 ].

Проведенные исследования показали ( табл. 1 ), что скорость потребления кислорода микросомами интактных животных после добавления к ним НАДН и НАДФН возрастает более чем в 2 и 3 раза соответственно. Причем, НАДФН активирует дыхание в 1,7 больше, чем НАДН, что согласуется с литературными данными [ 5 ].

Введение интактным животным омега-3 ПНЖК не оказывает существенного влияния на дыхание микросом и содержание цитохромов Р-450 и b₅.

Экспериментальное поражение легких сопровождается повреждением мембран эндоплазматического ретикулума печени, о чем свидетельствует снижение дыхательной активности микросом в 1,4 раза и в 1,9 раза при окислении НАДН и НАДФН соответственно и

содержания цитохрома Р-450 в 1,7 раза. При этом скорость окисления эндогенных НАДН и

НАДФН не меняется.

Применение омега-3 ПНЖК с профилактической целью у животных с пневмосклерозом приводит к нормализации скорости дыхания микросом как при окислении НАДН, так и НАДФН. Нормализуется содержание цитохрома Р-450.

При применении омега-3 ПНЖК с лечебной целью у животных с пневмосклерозом достоверно повышается скорость дыхания микросом при окислении НАДФН. Однако она не достигает уровня интактных животных.

Лечебно-профилактическое применение омега-3 ПНЖК у животных с пневмосклерозом приводит к достоверному увеличению до уровня нормальных величин скорости окисления как НАДН, так и НАДФН, нормализует уровень цитохрома Р-450.

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что экспериментальный пневмосклероз приводит к нарушению активности цепей переноса электронов, окисляющих НАДН и НАДФН и снижению содержания цитохрома Р-450 в микросомах печени.

Омега-3 ПНЖК при пневмосклерозе способствуют нормализации дыхательной активности микросом и увеличению содержания цитохрома Р-450.
Таблица 1. Влияние омега-3 ПНЖК на скорость окисления ( V_О2 ) НАДН и НАДФН ( в

нмоль O₂ мин/мг белка) и количество цитохромов Р-450 и b₅ (нмоль/мг белка) в

микросомах печени животных с экспериментальным пневмосклерозом (М±m)

Показатели	Группы животных
	интакт-ные животные n = 25	интактные животные получав-шие омега-3 ПНЖК n=7	животные с пневмосклерозом
			не получав-шие омега-3 ПНЖК n = 8	профилак-тическое введение омега-3 ПНЖК n = 7	введение омега-3 ПНЖК с лечебной целью n = 7	введение омега-3 ПНЖК с целью про-филактики и лечения n = 6
VО2 – без добавления НАДН	2,850,09	2,85±0,18	2,440,13	2,760,15	2,770,14	3,030,16
VО2 – с добавлением НАДН	5,830,15	5,99±0,28	4,110,18 *	5,380,26#	4,470,21*	5,370,28#
VО2 – без добавления НАДФН	3,000,11	2,79±0,19	2,560,14	2,950,18	2,850,17	3,090,15
VО2 – с добавлением НАДФН	9,800,22	9,94±0,47	5,030,31 *	8,540,44 #	6,750,34*#	8,910,46 #
Цитохром Р-450	0,80±0,03	0,76±0,03	0,46±0,02*	0,72±0,04 #	0,48±0,04*	0,74±0,05 #
Цитохром b5	0,48±0,03	0,51±0,03	0,45±0,02	0,45±0,02	0,49±0,03	0,47±0,02

Примечания:

1. * - разница показателей по отношению к интактным животным достоверна ( Р< 0,01 ).

2. # - разница показателей по отношению к животным с пневмосклерозом

достоверна ( Р<0,01 ).

Литература

1. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У. Справочник биохимика: Справочник / Под ред.
О.А. Реутова. – Перевод В.Л.Друцы, О.Н. Королёвой. – 3-е издание доп. и переработ. – М: Мир, 1991. – 543 с.

2. Карузина И.И., Арчаков А.И. Выделение микросомальной фракции печени и характеристика её окислительных систем // Современные методы в биохимии. – М.: Наука, 1977. – С. 49 – 63.

3. Минцер О.П., Угаров Б.Н., Власов В.В. Методы обработки медицинской информации. – Киев: Выща школа, 1991. – 272 с.

4. Руководство по изучению биологического окисления полярографическим методом / Под ред. Г.М. Франка, М.Н. Кондрашовой, Е.Н. Моховой и др. – М.: Наука, 1973. – 280 с.

5. Тиунов Л.А. Механизмы естественной детоксикации и антиоксидантной защиты // Вестник Российской АМН. – 1995. – № 3. – С. 9 – 13.

6. Успенский В.И. Экспериментальный гистаминовый пневмосклероз // Архив патологии. – 1962. - № 4. – С. 46 – 55.

7. Червонская Г.П., Панкратова Г.П. Этика медико-биологического эксперимента в доклинических исследованиях // Токсикологический вестник. – 1998. – № 3. – С. 2 – 8.

8. Allfroy V. Thе isolation of subzellular components // Biochemistry, physiology, morfology. –1969. – Vol. 11, № 7. – P. 254 – 255.