Перейти на главную страницу
03.02.11 – паразитология
кандидата ветеринарных наук
МАХАЧКАЛА – 2010
Работа выполнена на кафедрах микробиологии, гигиены и санитарии
ФГОУ ВПО «Кабардино-Балкарская государственная сельскохозяйственная академия им. В.М. Кокова»
Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией
паразитологии ГНУ РАСХН «Прикасийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» Магомедов Омаргаджи Ахмедгаджиевич
кандидат ветеринарных наук, доцент - Кадыжев Шамиль Магаруфович
аграрный университет»
Автореферат разослан «____» _________ 2010 г.
Ученый секретарь,
кандидат биологических наук, доцент М. М. Зубаирова
Цель и задачи исследований. Целью исследования является изучение особенностей экологии и эпизоотологии, распространения мониезиоза овец в Кабардино-Балкарской Республике, уточнение видового и возрастного состава Moniezia expansa и Moniezia benedeni у мелкого рогатого скота, определение срока дегельминтизации животных, терапевтической эффективности новых лекарственных форм препаратов - феррофен и вермитокс, разработка схемы лечения животных и определение иммунотропных свойств препаратов.
В соответствии с целью предстояло решить следующие задачи:
- изучить эколого-видовой состав и распространение возбудителей
мониезиоза в Кабардино-Балкарской Республике;
- определить экстенсэффективность препаратов феррофен и вермитокс;
- изучить иммунотропные свойства феррофена и вермитокса;
- разработать сроки дегельминтизации овец в регионе.
Научная новизна. В Кабардино-Балкарской Республике изучены эпизоотические особенности распространения, видовой состав возбудителей мониезиоза. Изучена терапевтическая эффективность феррофена и вермитокса. Проведена титрация доз, установлена терапевтическая доза, эффективность препаратов изучена в эксперименте и производственных условиях. Впервые определены иммунотропные свойства феррофена и вермитокса.
Практическая значимость. Для внедрения в ветеринарную практику всесторонне изучены терапевтическая эф-фективность феррафена и вермитокса, определена терапевтическая доза и изучены иммунотропные свойства препаратов. Продолжены исследования по применению иммуностимуляторов в комплексе с антгельминтиками, способствующие быстрому восстановлению иммунного статуса ягнят, вызываемых гельминтами и антгельминтиками. Данные по-эпизоотологическому мониторингу мониезиоза овец, иммунотропным свойствам препаратов и их терапевтической эффективности вошли в «Комплексную программу по борьбе с мониезиозом овец в Кабардино-Балкарской Республике», которые утверждены Министерством сельского хозяйства КБР (2007). Результаты изучения иммунного статуса ягнят; испытания иммуномодуляторов и антгельминтиков использовано при разработке «Рекомендаций по применению феррофена и вермитокса при терапии мониезиозной инвазии овец» (2008), которые утверждены РГУ «Управление ветеринарии Кабардино-Балкарской Республики» (протокол №8/1 от 20 августа 2008 г.). Данные о биоэкологии М. expansa и М. benedeni, о формировании биотопов инвазии используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Кабардино-Балкарская государственная сельскохозяйственная академия имени В.М. Кокова».
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
- эколого-эпизоотический мониторинг мониезиоза овец в Кабардино-Балкарской Республике;
- эколого-видовой состав возбудителей М. expansa и М. benedeni;
- терапевтическая эффективность феррофена и вермитокса;
- иммунотропные свойства феррофена и вермитокса; комплексная терапия при мониезиозе.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы прошли апробацию на Международной научн-практ. конф. ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет» (г. Саратов, 2006); Всероссийской научно-практической конференции ГНУ «Всероссийский НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина» (г. Москва, 2007); Междуна-родной научной конференции ФГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» (г. Москва, 2008); Международной научн.-практ. конф. ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный универси-тет» (г. Краснодар, 2008).
Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 10 научных статей (3 в рекомендованных ВАК РФ изданиях).
Личный вклад автора в работы, выполненные в соавторстве и включённые в диссертацию, состоит в формиро-вании направления, постановке общей задачи, личном участии во всех этапах работы: в ходе экспериментального исследования, в анализе и интерпретации полученных данных. В совместных публикациях вклад автора составил 80%. Соавторы не возражают в использовании результатов совместных исследований А.М. Атаевым (справки представлены в совет по защите диссертаций). Работа выполнялась под научным руководством доктора биологических наук, профессора А.М. Биттирова, который оказывал научно-методическую помощь в проведении исследований.
В КАБАРДИНО-БАЛКАРСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ
В разделе дана физико-географическая оценка 10 районов Кабардино-Балкарской Республики и их отличия от других регионов Северного Кавказа, характеристика природных компонентов 3-х природно-климатических поясов и технологий овцеводства в районах республики, а также дается краткая характеристика флоры и фауны равнинного, предгорного и горного пояса.
Особенности распространения мониезиоза в Кабардино-Балкарской Республике изучены путем гельминтологического вскрытия тонкого кишечника 854 овец в течение 6 лет исследований. Цестод идентифицировали и подсчитывали отдельно по видам. Результаты исследований отражены в таблице 1. Как видно, по данным вскрытия тонкого кишечника у 174 гол. обнаружено М. expansa и М. benedeni. В среднем, ЭИ составила 20,4%, при интенсивности инвазии М. expansa 1,980,18 экз./гол, М. benedeni – 1,270,13 экз./гол. В экосистеме Кабардино-Балкарской Республики у овец круглогодичного пастбищного содержания показатели ЭИ и ИИ мониезиоза были различными, что зависит степени биологической активности паразитарных систем М. expansa и М. benedeni на уровне промежуточного хозяина и биотических и абиотических факторов. В равнинном поясе, где характерно недостаточное увлажнение и относительная влажность 50%, средняя температура воздуха в июле составляет 29С, а средний максимум доходит до 40С, осенью заморозки наступают в начале октября, а в декабре среднемесячная температура падает до –3,5 (средний абсолютный минимум равен –22С) показатели ЭИ и ИИ мониезиоза овец были минимальными и составили, соответственно, 7,7% и М. expansa – 1,50,17, М. benedeni – 1,00,12 экз./гол. В экосистеме засушливых выпасов Кабардино-Балкарии у овец, в среднем, ЭИ мониезиоза овец составил 13,5% и ИИ - М. expansa – 1,70,16, ИИ - М. benedeni – 1,20,10 экз./гол.
Экосистемы |
Исследовано, гол.
|
Инвазировано, гол.
|
ЭИ, %
|
ИИ М. expansa, экз./гол |
ИИ М. benedeni, экз./гол |
Засушливые выпасы |
170 |
23 |
13,5 |
1,70,16 |
1,20,10 |
Увлажненные пастбища |
187 |
59 |
31,6 |
2,70,21 |
1,80,15 |
Лесокустарниковые угодья |
175 |
46 |
26,3 |
2,20,18 |
1,10,11 |
Культурные пастбища |
167 |
34 |
20,3 |
1,80,18 |
1,30,12 |
Итого: |
854 |
174 |
- |
- |
- |
В среднем: |
- |
- |
20,4 |
1,980,18 |
1,270,13 |
При круглогодичной пастьбе отар овец на увлажненных пастбищах показатели ЭИ и ИИ мониезиоза были сравнительно больше и составляли, соответственно, 31,6% и М. expansa – 2,70,21, М. benedeni – 1,80,15 экз./гол. В лесокустарниковых и культурных угодьях критерии ЭИ и ИИ мониезиоза были сравнительно больше, чем на засушливых выпасах и варьровали в пределах, соответственно, 26,3-20,3% и М. expansa – 2,20,18- 1,80,18, М. benedeni – 1,10,11-1,30,12 экз./гол. При изучении помесячной восприимчивости молодняка овец мониезиозу установлено, что при пастьбе на увлажненных пастбищах в 2005-2008 гг. зараженность возрасла в начале лета от 27,4 до 31,8%, в конце лета – от 35,5 до 39,0%, а в середине осени снизилось от 38,1 до 29,2%. Экстенсинвазированность ягнят мониезиозом возрасла в течение 4-х лет с 38,0 до 69, 4% (более 2 раз), что связано с активным биотопоформированием орибатидных клещей на не вспаханных присельских земельных массивах (таблица 2).
Год |
Исследовано, гол. |
Соотношения инвазированных овец по месяцам | |||||||
Инвазировано |
ЭИ |
Июнь |
Август |
Октябрь | |||||
гол. |
% |
гол. |
% |
гол. |
% |
гол. |
% | ||
2005 |
128 |
49 |
38,0 |
13 |
27,4 |
17 |
35,5 |
19 |
38,1 |
2006 |
172 |
93 |
54,2 |
27 |
29,1 |
34 |
36,2 |
32 |
34,7 |
2007 |
208 |
126 |
60,4 |
40 |
31,6 |
47 |
37,0 |
39 |
31,4 |
2008 |
241 |
167 |
69,4 |
53 |
31,8 |
66 |
39,0 |
48 |
29,2 |
На увлажненных пастбищах овцы инвазированы одновременно М. expansa и М. benedeni. Следует отметить, что зимой и весной в тонком кишечнике ягнят все возрастные популяции М. expansa и М. benedeni (100%) достигают половозрелой стадии, в другие сезоны обнаруживаются, как имагинальные, так и преимагинальные формы, что также необходимо использовать при разработке методов терапии и профилактики инвазии.
3.4.1. Эпизоотическая характеристика пастбищных биотопов цестод М. expansa и М. benedeni в рав-нинном поясе
Для определения напряженности эпизоотической ситуации по мониезиозу в равнинном поясе Кабардино-Балкарской Республики было исследовано по 30 га пастбищ в каждом районе. Поэтапно были определены площади, % неблагополучных очагов инвазии, среднее количество яиц М. expansa и М. benedeni в 1 г почвы биотопа, плотность орибатидных клещей в 1 м2 биотопа, зараженность орибатидных клещей цистицеркоидами мониезий обоих видов. На выпасах равнинного пояса было подвергнуто копроовоскопии по 150 проб почвы различных типов пастбищ Прохладненского, Майского и Терского районов. По результатам овоскопии почв пастбищ равнинного пояса установлено количество биотопов М. expansa и М. benedeni, а также высокую плотность и зараженность орибатидных клещей цистицеркоидами мониезий обоих видов.
В Прохладненском районе отмечали наименьшее количество биотопов и относительно низкую плотность очагов инвазии М. expansa и М. benedeni. При исследовании 30 га пастбищ Прохладненского района выявлено 420 биотопов, площадь неблагополучных биотопов составила 11,4 га (38,0%) при средней площади 1 ед. биотопа 714,3 м2. В 1 г почвы было обнаружено, в среднем, 27,4 экз. яиц М. expansa и 20,9 экз. М. benedeni. Плотность орибатидных клещей в 1 м2 биотопа составила 148,413,6 экз., зараженность орибатидных клещей цистицеркоидами М. expansa 9,20,8%, М. benedeni – 6,40,5%.
В Майском районе количество, плотность и площади неблагополучных биотопов были сравнительно больше на круглогодично используемых пастбищах (табл. 3). На 30 га выпасов Майского района установлено наличие 572 единиц биотопов с площадью 16,8 га (56,0%) при средней площади 1 ед. биотопа 525,0 м2, обнаружено, в среднем, 33,8 экз. яиц М. expansa и 27,3 экз. М. benedeni в 1 г почвы. Плотность орибатидных клещей в 1 м2 биотопа на выпасах Майского района была больше и составила 185,2 экз., зараженность орибатидных клещей цистицеркоидами М. expansa 12,3%, М. benedeni – 8,0%.
На 30 га пастбищ Терского района было выявлено 644 единиц биотопов мониезиоза ягнят. Площадь неблагополучных биотопов составила 19,6 га (65,3%) при средней площади 1 ед. биотопа 465,8 м2. В 1 г почвы обнаружено, в среднем, 37,2 экз. яиц М. expansa и 30,4 экз. М. benedeni. На пастбищах Терского района плотность орибатид в 1 м2 биотопа составила 220,7 экз., а их зараженность цистицеркоидами М. expansa 16,5%, М. benedeni – 11,3%.
При овоскопии 500 проб почвы 5 типов пастбищных угодий наиболее загрязненными инвазионными элементами М. expansa и М. benedeni оказались переувлажненные луговые пастбища (96,0% загрязненных проб почвы), затем - умеренно увлажненные луговые пастбища (78,0%), лесокустарниковые выпасы (64,0%), долинные (50,0%), склоновые пастбища (29,0% загрязненных проб почвы) при разных значениях яиц кишечных цестод (таблица 3).
Тип пастбища |
Исследовано проб почвы |
Кол-во проб с яйцами М. expansa и М.benedeni |
% загрязненных проб почвы |
Среднее кол-во яиц М. expansa в 1г почвы, экз. |
Среднее кол-во яиц М. benedeni в 1г почвы, экз. |
Переувлажненные луговые |
100 |
96 |
96,0 |
52,35,6 |
41,04,3 |
Умеренно увлажненные луговые |
100 |
78 |
78,0 |
46,05,1 |
34,24,0 |
В 1 г почвы переувлажненных луговых пастбищ обнаруживается 52,35,6 экз. яиц М. expansa и 41,04,3 экз. М. benedeni; умеренно увлажненных луговых пастбищ, соответственно, 46,05,1 и 34,24,0 экз.; лесокустарниковых выпасов – 41,44,7 и 30,43,8 экз.; склоновых – 23,63,0 и 18,12,5 экз.; долинных пастбищ – 28,13,7 и 20,03,0 экз. В предгорном поясе средняя загрязненность почв яйцами цестод обоих видов составила 63,4% при обнаружении в 1 г почвы 38,34,4 экз. яиц М. expansa и 28,73,3 экз. М. benedeni (таблица 3). Как видно, в теплый период года в предгорном поясе пастбища сильно загрязнены яйцами цестод, что позволяет прогнозировать сложную эпизоотическую ситуацию по мониезиозу овец.
Биотопы мониезиозной инвазии ягнят в горном поясе формируются на высоте до 2800 м. н. у. моря на отгонно-горных выпасах Черекского, Чегемского и Эльбрусского районов. С целью изучения загрязненности пастбищ рай-онов яйцами М. expansa и М. benedeni в горном поясе было исследовано по 30 проб почвы. Для определения уровня контаминации пастбищных угодий было подвергнуто овоскопии проб почвы с 20 га выпасов низкогорного пояса (высота 1000-1500 м), среднегорного пояса (высота 1600-2000 м), высокогорного пояса (высота 2100-3000 м). На 20 га пастбищ горного пояса Черекского района определили 246 единиц биотопов с общей площадью 5,8 га (29,0%) при площади 1 ед. биотопа 813,0 м2. В 1г почвы обнаружено, в среднем, 24,72,9 экз. яиц М. expansa и 19,32,4 экз. М. benedeni. Плотность орибатидных клещей в 1 м2 биотопа на выпасах Черекского района составила 96,28,6 экз. при зараженности их цистицеркоидами М. expansa 10,30,9%, М. benedeni – 6,20,5%. На выпасах Чегемского района регистрировали 213 биотопов с площадью неблагополучных очагов 4,2га (21,0%) при площади 1 ед. биотопа 939,0 м2. В 1г почвы обнаружено, соответственно, 18,32,6 и 14,82,1 экз. яиц М. expansa и М. benedeni. Плотность орибатидных клещей в 1 м2 биотопа на выпасах Чегемского района составила 73,56,9 экз. при зараженности орибатидных клещей цистицеркоидами М. expansa 7,20,6%, М. benedeni – 4,40,3%. Пастбища Эльбрусского района сравнительно в меньшей степени загрязнены инвазионными элементами кишечных цестод. На 20 га выпасов выявлено 168 единиц биотопов с площадью 3,1 га (15,5%) при площади 1 ед. биотопа 1190,5 м2. В 1г почвы обнаружено, в среднем, 13,202,1 экз. яиц М. expansa и 9,501,8 экз. М. benedeni. Плотность орибатидных клещей в 1 м2 биотопа на выпасах Эльбрусского района составила 54,004,7 экз. при их зараженности цистицеркоидами М. expansa 5,00,4%, М. benedeni – 2,700,2%. Как видно, по результатам эколого-эпизоотологических исследований пастбищ горного пояса установлено их относительно низкий уровень контаминации яйцами М. expansa и М. benedeni, особенно, в высокогорном поясе. При этом также было установлено, что в низкогорных пастбищах уровень загрязненности почвы яйцами М. expansa и М. benedeni составил 53,0%, среднегорных – 34,0%, высокогорных – 11,0%. В почвах нивального пояса яиц цестод не обнаружено. Среднее количество яиц М. expansa в 1г почвы в низкогорном поясе составило 28,73,1 экз., М. benedeni – 22,42,7 экз., в среднегорном, соответственно, 17,32,5 и 13,82,0 экз., в высокогорном поясе – 10,22,0 и 7,41,6 экз. В среднем уровень загрязненности почвы горных пастбищ яйцами составил 23,0% при обнаружении в 1г почвы 18,72,5 экз. яиц М. expansa и 14,52,1 экз. М. benedeni. Исследования в горном поясе, показали на низкий уровень контаминации пастбищ инвазионными элементами кишечных цестод с увеличением высоты над уровнем моря.
Изучение сроков развития яиц М. expansa и М. benedeni в естественных условиях республики проводили на специально отведенном и отгороженном опытном участке, расположенном на территории хозяйства. Для определения жизнеспособности ежедекадно, начиная с 10-го дня после закладки опытов, брали пробы фекалий и почвы с яйцами. В каждом случае исследовали под микроскопом по 70 экз. яиц М. expansa и М. benedeni. Возможность перезимовывания яиц М. expansa и М. benedeni изучали следующим образом. В конце ноября яйца мониезий ставили на поверхность почвы (в смеси с фекалиями ягнят) и на глубину почвы 10-15 см. По истечении зимнего периода яйца из фекалий и почвы исследовали овоскопическими методами. Исследования показали, что в сохранении жизнеспособности яиц М. expansa и М. benedeni знчительную роль играет температура внешней среды. Так, в марте при средней температуре воздуха 10,7ºС количество жизнеспособных яиц М. expansa и М. benedeni составило, соответственно, 22,4 и 18,6%; в апреле (18,6ºС) – 26,2 и 21,0%; в мае (21,2ºС) – 29,5 и 23,8%; в июне (24,8ºС) – 33,0 и 26,4%; в июле (26,3ºС) – 28,7 и 24,3%; в августе (24,9ºС) – 36,9 и 28,4%; в сентябре (20,6ºС) – 40,3 и 32,0%; в октябре (16,0ºС) – 34,8 и 27,4%; в ноябре (10,2ºС) – 31,5 и 24,8%; в декабре (4,6ºС) – 29,6 и 21,3%. Во внешней среде в течение года сохраняется до 22,4-40,3% яиц М. expansa и 18,6-32,0% яиц М. benedeni. Изучение возможности перезимовывания яиц М. expansa и М. benedeni показало на то, что зрелые яйца цестод, находящиеся с 30 ноября по 10 марта на поверхности почвы оказались погибшими. Зрелые яйца мониезий, находящиеся в течение указанного срока в фекалиях ягнят также оказались не жизеспособными. На глубине почвы 5-20 см сохраняли жизнеспособность 22,4% зрелых яиц М. expansa и 18,8% М. benedeni. Не зрелые яйца цестод оказались более устойчивыми к воздействию низких и чередующих температур. В фекалиях ягнят сохраняли жизеспособность 29,6% не зрелых яиц М. expansa и 26,4% не зрелых яиц М. benedeni. На глубине почвы 15-20 см критерии жизеспособности не зрелых яиц цестод были больше и составляли, соответственно, 40,6 и 37,8%. Такое количество жизнеспособных зрелых и не зрелых яиц способно индуцировать раннее весеннее заражение орибатидных клещей и активизировать эпизоотический процесс мониезиоза ягнят с двух вершинным пиком инвазии летом и осенью.
Исследования проводили в равнинном поясе в неблагополучном по мониезиозу пойменном пастбище. В таблице 4 приведены данные динамики зараженности орибатидных клещей (без видовой дифферинциации) цистицеркоидами мониезий обоих видов.
Месяц |
Плотность орибатидных клещей на 1 м2 |
Кол-во орибатидных клещей |
Количество инвазированных орибатидных клещей |
% инвазированности |
Март |
127 |
250 |
22 |
8,6 |
Апрель |
188 |
268 |
26 |
9,8 |
Май |
216 |
220 |
27 |
12,4 |
Июнь |
255 |
260 |
39 |
14,9 |
Июль |
293 |
240 |
38 |
16,1 |
Август |
328 |
258 |
53 |
20,4 |
Сентябрь |
284 |
253 |
49 |
19,2 |
Октябрь |
156 |
282 |
44 |
15,6 |
Ноябрь |
98 |
263 |
31 |
11,8 |
Как видно, плотность орибатидных клещей в теплый период варьировал в пределах 216-328 экз./м2 биотопа. Максимальную зараженность орибатидных клещей цистицеркоидами М. expansa и М. benedeni регистрировали в августе-сентябре (19,2-20,4%).
Имунотропную активность феррофена изучали в соответствии с «Методическими рекомендациями по экспери-ментальному изучению иммунотропной активности фармакологических препаратов», одобренными Фармкомитетом МЗ России (1998 г.). По выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и розеткообразующих клеток (ауто-РОК) судили о влиянии феррофена на клеточное звено иммунитета.
Реакция гиперчувствительности замедленного типа. В результате установлено, что индекс стимуляции (ИС) у опытных мышей линии BALB/C был на уровне 10,6±0,2, а в контроле 2,4, что данные свидетельствуют о повышении функциональной активности Т лимфоцитов (табл. 5).
Таблица 5. Реакции гиперчувствительности замедленного типа
№ группы |
Доза феррофена |
Кратность |
ИС |
1 |
0,03 мл/гол |
3 |
10,6±0,2 |
2 |
контроль |
- |
2,4 |
Как видно, феррофен в дозе 0,03 мл/гол, введенный трехкратно внутрь обладает иммуностимулирующими свойствами.
Динамика ауто-РОК у животных на фоне введения феррофена
Результаты изучения динамики ауто-РОК у мышей представлены в таблице 6. При введении феррофена в тече-ние 3-х дней в дозе 0,03 мл/гол интактным мышам, кинетика ауто-РОК характеризовалась повышением абсолютного и относительного количества розеткообразующих клеток в крови мышей и составляла на 5-й день исследования 1321,5±32,3 клеток в 1 мкл крови с последующим понижением до 973,8±16,5 клеток в 1 мкл крови к 15-му дню против 61,2±3,7 клеток в 1 мкл в контроле (таблица 6).
№ группы |
Препарат |
Дни исследований | |
5 |
15 | ||
1 |
Феррофен |
1321,5±32,3* |
973,8±16,5 |
2 |
Контроль |
71,4±5,7 |
61,2±3,7 |
Определение антителообуазуюших клеток. Индекс стимуляции иммунного ответа высчитывали, как отношение числа АОК в селезенке мышей, получивших феррофен, к числу АОК в селезенке мышей контрольной группы. Устано-вили, что феррофен стимулирует АОК в селезенке мышей при иммунизации эритроцитами барана (табл. 7). Так, содержание спленоцитов в селезенке под влиянием феррофена увеличилось в 1,43 раза. Число АОК на всю се-лезенку повысилось в 1,3 раза, на 106 спленоцитов – в 2 раза, что указывают на активацию трансформации В лимфоцитов в АОК селезенки.
Препарат |
Кол-во животных
|
Доза, мл/гол.
|
Число спленоцитов на селезенку |
Число АОК на всю |
Р | |
селезенку |
на 106 спленоцитов | |||||
Феррофен |
10 |
0,03 |
360,5±28,3 |
10,27±1,2 |
38,7±2,8 |
<0,05 |
Контроль |
10 |
- |
250,8±21,7 |
7,9±0,28 |
19,3±1,8 |
|
При оценке действия феррофена на гуморальный иммунитет изучали влияние препарата на индуктивную и продуктивные фазы.
Титр гетерофильных агглютининов. Введение феррофена повышало титры антител к тимусзависимому анти-гену – ЭБ и у мышей в сыворотке крови они регистрировались на уровне 3,75-4,3 (Iog2) через неделю после иммунизации, а в контроле были на уровне 2,25-2,4 (Iog2). Более высокий уровень 2gM - 4,3 (Iog2) по сравнению с 2gG - 3,75 (Iog2), говорит о том, что феррофен действует на индуктивную фазу иммунитета, чем на продуктивную.
Кинетика В-лимфоцитов. В опыте на мышах линии BALB/C в динамике относительного количества В-лимфоцитов наблюдали увеличение содержания ЕАС-РОК на 10-15-е дни после введения феррофена до 21,8±1,5-22,7±1,3% по сравнению с контролем 17,8±1,9% (таблица 8).
№ группы
|
Доза феррофена |
Кратность |
10-й день |
15-й день |
1 |
0,03 мл/гол. |
3 |
21,8±1,5 |
22,7±1,3 |
2 |
Контроль |
- |
17,8±1,9 |
17,3±1,6 |
Определение терапевтической дозы феррофена при мониезиозе ягнят проведено в июле на ягнятах 4-5 мес. возраста. Первоначально провели титровку терапевтической дозы феррофена на 30 гол ягнят, спонтанно инвазиро-ванных мониезиями, отобранных на основании результатов копрологических исследований по Фюллеборну. Из ягнят сформировали 7 равных групп. Ягнятам первой группы ввели 0,5% раствор феррофена в дозе 20 мл на гол; второй 10 мл на гол; третьей группе ввели 1% раствор феррофена в дозе 20 мл на гол; четвертой ввели 1,5% раствор феррофена в дозе – 15 мл; пятой – 10 мл; шестой – 1% раствор медного купороса в дозе 20 мл. Ягнята седьмой группы препарат не получали и служили контролем. При копроовоскопическом исследовании фекалий, 100%-ной эффект получили только от дозы 15 мл на голову 1,5% раствор феррофена, а доза 15 мл, равная половине рекомендуемой в инструкции дозы 1%-ного раствора медного купороса дала 80%-ный эффект. Эффективность от доз 10 мл 1% феррофена, 10 и 20 мл 0,5% феррофена на голову была недостаточной. Для определения интенсивности инвазии убили и провели гельминтологическое вскрытие желудочно-кишечного тракта трех ягнят контрольной группы, трех ягнят, получивших 1,5% раствор феррофена в дозе 15 мл на голову и трех ягнят, получивших медный купорос в дозе 30 мл/гол. У контрольных ягнят обнаружили в среднем 1,8 экз., у ягнят, получивших сульфат меди, обнаружили 1 цестоду. У ягнят леченых феррофеном в дозе 15 мл/гол мониезий не обнаруживали (табл. 9).
Клиническое исследование ягнят позволило установить, что животные легко переносили т феррофен, сохраняют аппетит и физиологический статус.
Таблица 9. Результаты гельминтологического вскрытия ягнят
Препарат |
Количество гол. |
Доза мл/гол.
|
Обнаружено мониезий, экз. | |
М. expansa |
М. benedeni | |||
1,5 % феррофен |
3 |
15 |
0 |
0 |
1 % медный купорос |
3 |
20 |
1 |
0 |
Контроль |
3 |
- |
3 |
2 |
4.3. Эффективность феррофена при спонтанном мониезиозе
Антгельминтную эффективность феррофена определяли в июне-июле на 50 ягнятах текущего года рождения, со средней живой массой 20 кг, спонтанно инвазированных мониезиями (Moniezia expansa и М. benedeni). Животных после взвешивания разделили на 5 равных групп (4 подопытных и одну контрольную). Ягнятам 1, 2 и 3 подопытных групп вводили однократно, индивидуально, внутрь феррофен в дозе соответственно 7, 10, 15 мл/голову; четвертой группе – 1%-ный раствор сульфата меди в дозе 20 мл/гол. Ягнята пятой группы препарат не получали и служили контролем. В период опыта ягнята всех групп выпасались в одной отаре. После дегельминтизации проводили наблюдения за клиническим состоянием животных. Антигельминтную эффективность феррофена учитывали по результатам копроовоскопических исследований методом Фюллеборна до и через 10 дней после назначения препаратов. Расчет эффективности антгельминтика проводили согласно «Руководства, одобренному Всемирной Ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии». Феррофен в дозе 15 мл/ гол показал 100%-ный эффект. При снижении дозы препарата до 7 мл/гол. 6 из 10 леченых животных освободились от мониезий. Количество яиц мониезий в фекалиях снизилось с 369,6±27,5 до 88,6±7,9 в 1 г, т.е. на 76,1%. При снижении дозы до 15 мл/гол. 8 из 10 леченых освободилось от цестод, а количество яиц сократилось с 339 до 46 экз./г фекалий, т.е. на 87%. В опытной группе, где применяли 1% раствор сульфата меди (в дозе 20 мл/гол) из 10 леченых животных освободилось от мониезий 6; количество яиц в фекалиях снизилось на 73,1%. Количество яиц М. expansa и М. benedeni г фекалий молодняка овец контрольной группы в период опыта оставалось примерно на одном уровне (353±24 и 358±27). Следует отметить, что ягнята хорошо переносили препараты. Не отмечено побочного действия феррофена на организм ягнят, как в период дегельминтизации, так и в течение 10 сут. после нее. При гельминтологическом вскрытии тонкого отдела кишечника 5 (выборочно убитых) ягнят из контрольной группы обнаружили в среднем по 2,0±0,4 экз. М. expansa и по 1,2±0,3 экз. М. benedeni. Анализ полученных результатов показал, что феррофен является высокоэффективным цестодоцидом. В опыте же, эффективность сульфата меди в дозе 20 мл/гол оказался невысоким.
4.4. Комиссионные испытания феррофена при мониезиозе ягнят
Комиссионные испытания феррофена проводили в июле-августе на 30 ягнятах 4-5 мес. возраста, средней живой массой 20 кг, спонтанно инвазированных Moniezia expansa и М. benedeni. Феррофен в дозе 15 мл/гол, задали 15 ягнятам первой группы перорально однократно, индивидуально, утром до кормления. Ягнята второй группы (15 гол) служили контролем. При испытании препарата проводили наблюдения за клиническим состоянием ягнят. Эффективность препарата учитывали по результатам копроовоскопических исследований методом Фюллеборна проб фекалий от 15 ягнят подопытной и контрольной групп до и через 10 дней после дачи препарата, а также на основании гельминтологического вскрытия желудочно-кишечного тракта выборочно убитых животных (по 5 голов из группы) через 10 дней после дачи препарата. Ягнята хорошо переносили препарат. Побочного действия феррофена на организм ягнят не отмечено. Через 10 дней после дегельминтизации, яйца мониезий у подопытных ягнят первой группы не находили, во второй - в среднем по 276,0±32,5 экз./яиц в 1г. фекалий Через 10 дней после назначения феррофена результаты опыта оценивали путем убоя животных и гельминтологического исследования кишечников (по 5 ягнят из опытной и контрольной групп). Результаты исследований приведены в таблице 10. По результатам вскрытия кишечника 5 подопытных ягнят мониезии не были обнаружены (ЭЭ и ИЭ = 100%). У контрольных ягнят обнаружено, в среднем, 3 экз. М. expansa и 2 экз. М. benedeni.
Группа |
Количество животных |
Доза препарата мл/гол.
|
Обнаружено мониезий |
ИЭ, % |
ЭЭ, % | |
М. expansa |
М. benedeni | |||||
Подопытная |
5 |
15,0 |
- |
- |
100 |
100 |
Контрольная |
5 |
- |
3 |
2 |
- |
- |
Как видно, феррофен показал 100% эффективность при мониезиозе овец при однократном пероральном введении орально в дозе 15 мл/ гол.
Испытания феррафена в производственных условиях проводили на 420 ягнятах 4-5 мес. возраста, спонтанно инвазированных мониезиями. Препарат задавали ягнятам со средней массой 20 кг в дозе 15 мл/ гол, внутрь, однократно, индивидуально, утром. В качестве контроля отобрали 15 ягнят, которым препарат не давали. Эффективность феррофена учитывали по результатам копроовоскопичеких исследований по Фюллеборну 30 проб фекалий ягнят подопытной и 15 проб контрольной групп до и через 10 дней после назначения. Экстенсивность заражения мониезиями составила 100%. Овоскопия фекалий подопытных овец через 10 дней после назначения феррофена показали, что ягнята полностью освободилось от мониезий, так как фрагментов мониезий и их яиц не обнаружено. В пробах контрольных ягнят, в среднем, обнаружили по 282±26 - 293±28 экз. яиц в 1г. фекалий. При наблюдении за подопытными животными отмечено, что ягнята хорошо переносили препарат. Побочного действия феррофена на организм ягнят не отмечено. Феррофен в дозе 15 мл/гол при однократном индивидуальном введении, по данным копрологических исследований, показал 100%-ную антгельминтную эффективность при мониезиозе ягнят. Препарат хорошо переносится и не вызывает физиологических отклонений по сравнению с контрольными ягнятами.
Изучение иммунотропной активности вермитокса провели в соответствии с «Методическими рекомендациями по экспериментальному изучению иммунотропной активности фармакологических препаратов», одобренными МЗ России (1998 г.). О влиянии вермитокса на клеточное звено иммунитета судили по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и аутологичным розеткообразующим клетками (ауто-РОК).
Реакция гиперчувствительности замедленного типа. У мышей линии BALB/C индекс стимуляции (ИС) был на уровне 4,5±0,3, а в контроле 5,0. Эти данные свидетельствуют об индифферентном отношении Т лимфоцитов (таб-лица 11). Вермитокс в дозе 3,5 мкл/гол, введенный трехкратно внутрь, не угнетает клеточное звено иммунитета.
Таблица 11. Реакция гиперчувствительности замедленного типа
№ группы |
Доза препарата |
Кратность |
ИС |
1 |
3,5 мкл/гол |
3 |
4,5±0,3 |
2 |
Контроль |
- |
2Д |
Динамика ауто-РОК у животных на фоне введения вермитокса
Исследования проводили на 5 и 15 дни после назначения препарата. Установлено, что при введении вермитокса в дозе 3,5 мкл/гол в течение 3-х дней интактным мышам, кинетика ауто-РОК характеризовалась некоторым снижением абсолютного и относительного количества розеткообразующих клеток в крови мышей, и составляла на 5-й день исследования 61,4±8,7 клеток в 1 мкл крови с последующим понижением до 51,1±4,4 клеток в 1 мкл крови к 15 му дню против 62,7±3,4 клеток в 1 мкл в контроле (табл. 12).
Таблица 12. Динамика ауто-РОК (клеток/мкл)
№ группы |
Препарат |
Дни исследований | |
5 |
15 | ||
1 |
вермитокс в дозе 3,5 мкл/гол |
61,4±8,7 |
51,1±4,4 |
2 |
Контроль |
81,5±8,1 |
62,7±3,4 |
Фгоу впо «Кабардино-Балкарская государственная сельскохозяйственная академия им. В. М. Кокова»
16 12 2014
3 стр.
Азиатско-Тихоокеанском Регионе», гос контракта с Министерством образования и науки П1496 от 03. 09. 2009 «Разработка методов оперативной оценки состояния фитопланктонных сообществ
14 12 2014
1 стр.
Ледово-каменные обвалы в Казбек-Джимарайском горном узле Центрального Кавказа и их прогнозирование
03 09 2014
1 стр.
Тема: «Медицинская паразитология, ее значение в обеспечении здоровья населения. Предмет медицинская паразитология. Основные понятия, цели и задачи медицинской паразитологии на совр
24 09 2014
1 стр.
Эколого-биологические особенности видов рода artemisia из подрода seriphidium (bess.) Rouy и перспективы их использования в узбекистане
01 10 2014
1 стр.
Первичные и вторичные морфологические элементы. Основные патоморфологические изменения в коже. Принципы общей и наружной терапии. Особенности наружной терапии у детей
10 10 2014
1 стр.
Исследование теоретических объектов самой математики, решение теоретических проблем, разработка методов решения задач с применением вычислительных методов и средств вычислительной
25 09 2014
1 стр.
Целью данной работы является разработка методов классификации и поиска графической информации и создание информационной системы, позволяющей создавать, управлять и анализировать ко
26 09 2014
1 стр.