Использование перекиси водорода

20 января 2011 - PsyMaster

Использование перекиси водорода при работе с агаровыми средами,
для минимизации рисков заражения при пересевании.

Большинство микологов не используют агар из-за страхов неизбежного заражения. Было обнаружено, что при добавлении перекиси водорода к агару можно делать пересевы с минимальными шансами постороннего заражения.

Также многие не в курсе, что может и не может перекись. Перекись может убивать бактерии, грибковые плесневые споры, тормозит рост дрожжей. Плохо конечно, что она убивает и полезные грибные споры, но, с другой стороны, она также убивает и споры вездесущей зеленой плесени, что есть хорошо.

Уже сформировавшие мицелий грибные колонии выделяют специальные энзимы, способные расщеплять перекись до воды и свободного кислорода. Причем это справедливо и для сформировавшихся колоний зеленой плесени - для них перекись уже не страшна. Но всеже наилучший плюс перекиси водорода это то, что она убъет все бактерии и вы никогда не столкнетесь с бактериальным заражением.

Для приготовления агарной среды необходим порошок экстракта солода, агар-агар и чашки Петри. Берем 3г порошка солода и 3г агар-агара (иногда они продаются в смеси, тогда берется 6г смеси) и разводим в 150мл воды. После тщательного перемешивания смесь переливается в емкость на 250-300мл, закрывается ватно-марлевой пробкой и стерилизуется в скороварке 45мин. После этого еще горячая емкость со средой помещается на рабочий стол, предварительно обработанный дезинфицирующим раствором.

Перекись водорода разлагается при 140*F, поэтому необходим стерильный термометр - при достижени температуры среды 130*F к смеси добавляется 1мл перекиси водорода и размешивается термометром. Не пропустите этот момент, т.к. при 120*F среда застывает. После этого среда разливается в предварительно простерилизованные чашки Петри. Обычно этого объема хватает на 9-10 чашек.

Количество перекиси вполне достаточное и может колебаться в пределах 6-10мл 3% перекиси водорода для литра(!) такой смеси.

После пересева мицелия, особенно первичного пересева, наблюдается период адаптации в течение 1-2 дней, когда мицелий формирует соответствующие энзимы для разщепления перекиси. В этот период мицелий практически не растет, а по завершении адаптацииначинает скорость роста восстанавливается.

Можно не ограничиваться только солодовым агаром и использовать любой другой, лишь добавляя перекись когда температура среды опустится до 120*F(~50*С).
Многие из тех, кто выращивал мицелий на пшенице, сталкивались с проблемой закисания зернового субстрата (пшеница), в особенности те, для кого скороварка недоступна. И зачастую не помогает ни просушка зерна перед стерилизацией, ни дробная стерилизация, ни тщательное соблюдение условий стерильности.

Вероятность закисания можно значительно снизить, если перед отвариванием зерна добавить в воду, в которой зерно будет вариться, раствор перекиси водорода. Метод успешный, проверенный на личном (и не только) опыте.

На литр зерна берется 100-150 мл 3%-ной перекиси водорода (продается в аптеках). Стоит заметить, что выгоднее приобрести в магазине химреактивов 35%-ную, которая стоит около 1$ за литр, и просто разбавлять по мере надобности до нужной концентрации.

Перед добавлением перекиси обязательно зерно тщательно промыть. Иначе эффект обеззараживания может существенно снизиться или сойти на нет из-за массы загрязнений, присутствующих в зерне.

От количества воды, в которой будет вариться зерно, также зависит концентрация раствора, а следовательно, эффективность метода. Поэтому воды лучше не переливать. Достаточно налить воды столько, сколько необходимо для отваривания и не более (чтоб покрывала зерно примерно сантиматра на 2-3). Залив зерно, дать ему постоять минут 10. Затем, постепенно нагревая (при нагревании перекись водорода разлагается), довести до кипения. При этом жидкость будет заметно пениться. (Дальнейшие действия – см. методики по культивации.)