Отдел образования администрации Центрального района Муниципальное бюджетное образовательное учреждение Экономический лицей

Научно – исследовательская работа по теме:
Хроматография на бумаге

Демидова Ивана Сергеевича

Ученика 9Б класса

МОБУ экономический лицей

Центрального района
Научный руководитель:

Шахова Татьяна Николаевна учитель химии

высшей квалификационной категории

контактный телефон: 2-18-15-13

Оглавление
Введение………………………………………………………………………... 3
1. Цели, задачи и научная новизна исследования……………………………. 4
2. Обзор литературы…………………………………………………………… 5
2.1. Адсорбция вещества – основа хроматографии………………………….. 5
2.2. Классификация методов хроматографии………………………………… 6
2.3. Распределительная хроматография на бумаге………………………….. 7
3. Объекты и методы исследования…………………………………………… 13
3.1. Методика нахождения молярных концентраций веществ в растворе методом градуировочного графика…………………………………………… 13
4. Результаты исследования…………………………………………………… 15
Заключение…………………………………………………………………... 20
Список литературы…………………………………………………………… 21
Приложения………………………………………………………………….. 22
Введение
Хроматографический метод анализа разработан русским ботаником М.С. Цветом в 1903 году. В первых своих работах с помощью этого метода М.С. Цвет установил, что считавшийся однородным зеленый пигмент растений – хлорофилл – на самом деле состоит из нескольких веществ. При пропускании экстракта зеленого листа через колонку, заполненную порошком мела, и промывании петролейным эфиром, он получил несколько окрашенных зон, что с несомненностью говорило о наличии в экстракте нескольких веществ. Впоследствии это было подтверждено другими исследователями. Этот метод он назвал хроматографией (от греческого хроматос – цвет), хотя сам же указал на возможность разделения и бесцветных веществ. Работы М.С. Цвета довольно долгое время оставались забытыми и не привлекали внимания. Это было связано с отрицательной оценкой этих работ, которую дали некоторые авторитеты того времени. Заметное развитие хроматографических методов началось в 30-е годы двадцатого века, когда возникла острая потребность в новом методе разделения смесей и очистке веществ, разлагающихся при нагревании. Хроматография продолжает бурно развиваться и в настоящее время является одним из перспективных методов анализа. О значимости хроматографии говорит тот факт, что за работы, выполненные с применением хроматографических методов, было присуждено четырнадцать нобелевских премий [1].

1. Цели, задачи и научная новизна исследований
Целью данной работы является изучение хроматографии на бумаге и нахождение молярных концентраций определяемых веществ методом градуировочного графика (метод калибровочных кривых).

В соответствии с этим в работе были поставлены следующие задачи:

● изучить литературу по теме исследования

● приготовить растворы хлорида меди (+2), дихромата аммония, сульфата железа (+2) заданной молярной концентрации и неизвестной концентрации

● визуально выявить пятна (зоны) веществ на хроматограмме

● рассчитать поочередно площадь каждого хроматографического пятна с помощью масштабно – координатной бумаги

● сравнить интенсивность окраски хроматографических пятен

● сделать фотографии хроматографических пятен

● составить таблицы с занесением молярных концентраций исследуемых растворов и площадей хроматографических пятен

● по результатам измерения площади пятен растворов с различной точно известной концентрацией и пятна анализируемого раствора с неизвестной концентрацией построить градуировочный график в координатах «площадь – молярная концентрация (ее десятичный логарифм)»

● по найденному значению S_x найти молярную концентрацию определяемого вещества

Научная новизна работы заключается в построении градуировочных графиков и нахождении с помощью графика молярной концентрации исследуемого вещества
2. Обзор литературы

2.1. Адсорбция вещества – основа хроматографии
Хроматографию можно определить как процесс, основанный на многократном повторении актов сорбции и десорбции вещества при перемещении его в потоке подвижной фазы вдоль неподвижного сорбента.

Сорбцией (от лат. - sorbeo – поглощаю) называют процесс поглощения твердым телом или жидкостью (сорбентом) газообразного или растворенного вещества (сорбата), обратный процесс называют десорбцией [1]. Сорбцию подразделяют на адсорбцию поглощения вещества (адсорбата) поверхностью твердого или жидкого адсорбента и абсорбцию – поглощение вещества (абсорбата) поверхностью абсорбента.

Поглощение вещества сорбентом с образованием химических соединений называют хемосорбцией (химической сорбцией).

Вещество подвижной фазы непрерывно вступает в контакт с новыми участками сорбента и частично сорбируется, а сорбированное вещество контактирует со свежеми порциями подвижной фазы и частично десорбируется [1].

При постоянной температуре адсорбция увеличивается с ростом концентрации раствора или давления газа. Зависимость количества поглощенного вещества от концентрации раствора или давления газа при постоянной температуре называют изотермой адсорбции.

Математически эта зависимость может быть выражена уравнением Лэнгмюра
n = n_∞∙ bc / 1+bc, (1)
где n – количество адсорбированного вещества при равновесии; n_∞ - максимальное количество вещества, которое может быть адсорбировано на данном адсорбенте; b – постоянная; с – концентрация.

В области небольших концентраций изотерма линейна и уравнение (1) переходит в

n = n_∞∙ bc (2)
Это уравнение линейной адсорбции. При высокой концентрации bc » 1, и уравнение (2) принимает вид n = n_∞, что соответствует так называемому насыщению: изотерма адсорбции выходит практически на прямую, параллельную оси абсцисс [1].
2.2. Классификация методов хроматографии
Хроматография представляет собой метод разделения и анализа смесей веществ, основанный на различном распределении компонентов между двумя фазами – неподвижной (носитель) и подвижной (элюент).

Различные методы хроматографии можно классифицировать по агрегатному состоянию фаз, способу их относительного перемещения, аппаратному оформлению процесса и т. д. По агрегатному состоянию фаз хроматографические методы обычно классифицируют следующим образом (таблица 1).

Таблица 1. Классификация методов хроматографии по агрегатному состоянию фаз [1]

Неподвижная фаза	Подвижная фаза
	газообразная	жидкая
Твердая	Газовая адсорбционная хроматография	Жидкостная адсорбционная, ионообменная, ионная, тонкослойная, осадочная хроматографии
Жидкая	Газожидкостная распределительная и капиллярная хроматографии	Жидкостная распределительная, высокоэффективная жидкостная, хельхроматография

По механизму разделения различают следующие виды хроматографии: адсорбционную, распределительную, ионообменную, осадочную, окислительно-восстановительную и адсорбционно-комплексообразовательную [5].

По способу разделения компонентов анализируемой смеси и аппаратного оснащения различают следующие методики: хроматография на колонке, на бумаге, в тонком слое сорбента, газовая, высокоэффективная жидкостная хроматография и другие [4].
2. 3. Распределительная хроматография на бумаге
Трудно даже представить, что самый обычный лист бумаги может служить своеобразной лабораторией химического анализа. На нем определяют состав химических соединений, разделять которые бессильны многие химические и физические методы.

Простейшую хроматограмму на бумаге нетрудно получить самому [3]. Нужно приготовить смесь любых растворимых в воде красок, например акварельных. Нанести маленькую каплю смеси в центр бумажного листа. Затем точно в середину цветного пятнышка ввести по каплям воду. Впитается одна – капнуть другую. И вскоре по листу бумаги начнет расползаться настоящая красочная хроматограмма.

Бумажная хроматография – метод анализа состава исследуемого вещества был открыт в 1944 году Констоном, Гордоном, Мартином и Сенджем, которые использовали его для анализа аминокислот [6].

Мартин и Сенж впоследствии были удостоены Нобелевской премии за открытие распределительной хроматографии, но с 1952 года бумажную хроматографию начал вытеснять новый метод тонкослойной хроматографии.

Хроматография на бумаге является вариантом распределительной хроматографии, при этом специальная фильтровальная бумага служит носителем неподвижной фазы (например, воды), а система растворителей – подвижной фазы, которая перемещается по бумаге под действием капиллярных сил. Во время движения указанная фаза растворяет вещества, нанесенные на бумагу, и перемещает их с собой. Деление компонентов смеси достигается за счет различной скорости их перемещения, которая зависит от величины коэффициента распределения между подвижной и неподвижной фазами [4].

Коэффициентом распределения вещества между двумя несмешивающимися растворителями называют отношение концентрации вещества в подвижном растворителе к концентрации того же вещества в другом (неподвижном) растворителе:

К = С_подв./ С_{неподв.}

В распределительной хроматографии одним из растворителей обычно служит вода [5].

В последнее время в качестве носителя для неподвижного растворителя вместо колонки используют полоски или листы фильтровальной бумаги, не содержащей минеральных примесей. В этом случае каплю водного испытуемого раствора, например смесь растворов солей железа (III) наносят на край полоски бумаги. Бумагу подвешивают в закрытой камере (рисунок 2), опустив ее край с нанесенной на него каплей испытуемого раствора в сосуд с растворителем, например с н – бутиловым спиртом. Растворитель, перемещаясь по бумаге, смачивает ее. При этом каждое содержащееся в анализируемой смеси вещество с присущей ему скоростью перемещается в том же направлении, что и растворитель [5].
По окончании разделения ионов бумагу высушивают и затем опрыскивают реактивом, например K₄ [Fe(CN)₆] - желтой кровяной солью, который образует окрашенные соединения с Fe³⁺ и Co²⁺. Образующиеся при этом зоны в виде окрашенных пятен позволяют установить состав смеси (рисунок 3). Такой вид распределительной хроматографии называют бумажной хроматографией [2].

Бумажная хроматография в сочетании с применением органических реактивов дает возможность провести качественный анализ сложных смесей катионов и анионов. На одной хроматограмме при помощи одного реактива можно обнаружить ряд веществ, так как для каждого вещества характерно не только соответствующее окрашивание, но и определенное место локализации на хроматограмме.

Хроматография на бумаге с успехом применима для разделения очень близких по химическим свойствам компонентов, определение которых обычными химическими методами затруднительно [5].

Хроматографическая бумага должна быть химически чистой, нейтральной, инертной по отношению к компонентам раствора и подвижному растворителю и быть однородной по плотности. Имеют значение также такие свойства, как структура молекул целлюлозы в бумаге, набухаемость, Ориентация волокна и другие, влияющие на скорость движения растворителя.

В атмосфере водяных паров бумага поглощает значительное количество влаги (до 20-25% своей массы), поэтому, когда неподвижной жидкой фазой является вода, никого дополнительного увлажнения бумаги не делают.

В растворителе, являющемся подвижной фазой, растворимость каждого компонента должна быть меньшей, чем в растворителе неподвижной фазы.

Это ограничение связано с тем, что если растворимость вещества будет очень велика, вещество будет двигаться с фронтом растворителя, а если растворимость будет очень мала, вещество останется на начальной линии.

К растворителям обычно предъявляются следующие требования: растворители подвижной и неподвижной фаз не должны смешиваться, состав растворителя в процессе хроматографирования не должен изменяться, растворители должны быть безвредными для человека.

Чаще употребляют смеси веществ, например бутилового или амилового спирта с метиловым или этиловым спиртами [1].

Скорость перемещения веществ на хроматограмме оценивают по отношению расстояния от стартовой линии хроматограммы до центра пятна вещества к расстоянию, пройденному фронтом подвижной фазы.

Выявление пятен (зон) веществ на хроматограмме производится различными способами: визуально, если вещества образуют окрашенные зоны; с помощью ультрафиолетового света, если вещества флюоресцируют; с помощью детектирующих реактивов – по образованию окрашенных зон.

Воспроизведение результатов анализа при хроматографии на бумаге достигается стандартизацией следующих факторов [4]:

• 
  характеристики бумаги для хроматографии;
  
• 
  конструкции и размеров камеры;
  
• 
  состава неподвижной и подвижной фаз;
  
• 
  объема наносимой пробы;
  
• 
  характеристики стандартных веществ;
  
• 
  способа хроматографирования;
  
• 
  степени насыщения камеры;
  
• 
  расстояния, пройденного подвижной фазой»;
  
• 
  способа обнаружения веществ.
  

Количественные определения в распределительной хроматографии выполняются по площади пятна на хроматограмме и интенсивности его окраски. Нередко хроматограмму разрезают на отдельные части по числу пятен, каждое пятно обрабатывают соответствующим реактивом и определяют площадь пятна с помощью масштабно – координатной бумаги.

Методики, основанные на использовании хроматографических характеристик, довольно многообразны. Количество вещества можно определить методом шкалы, когда на одной и той же хроматограмме получают пятно раствора с неизвестной концентрации и пятна нескольких стандартов. Концентрацию исследуемого раствора находят прямым сравнением площади пятна и интенсивности его окраски исследуемого и стандартного растворов.

Более точным является метод, основанный на применении градуировочного графика S – lg c, где S – площадь пятна, с – концентрация. В указанных координатах график линеен. Используется также измерение интенсивности окраски пятна, которая пропорциональна концентрации. Методами распределительной жидкостной хроматографии успешно анализируют смеси катионов в неорганическом анализе, смеси аминокислот, смеси красителей и т. д. [4].

3. Объекты и методы исследования

3.1. Методика нахождения молярной концентрации вещества в растворе методом градуировачного графика (метод калибровочных кривых)
Объекты исследования: растворы анализируемых веществ раной молярной концентрации [растворы хлорида меди (+2); дихромата аммония; сульфата железа (+2)]

Приборы и материалы: химические стаканы, стеклянные палочки, фильтровальная бумага, дозаторы, чашки Петри.

Растворители: подвижная фаза – смесь этилового (C₂ H₅ OH) и бутилового (C₄H₉OH) спиртов, неподвижная фаза – вода.

Методика проведения эксперимента [4].
Приготавливают три раствора CuCl_2. Два раствора молярной концентрации 7,4 ∙ 10^-2 моль/л и 8,9 ∙ 10^-2 моль/л, третий раствор неизвестной концентрации.

В чашку Петри наливают растворитель - смесь этилового и бутилового спиртов (подвижная фаза). На фильтровальной бумаге карандашом чертят линию старта, на которую с помощью тонкого капилляра наносят анализируемые растворы (неподвижная фаза) на одинаковом расстоянии (не менее 1 см).

Фильтровальную бумагу (носитель неподвижной фазы) опускают в чашку Петри с растворителем до линии старта. Выявление пятен (зон) веществ на хроматограмме производят визуально. Капли высушивают и эту операцию проводят 2-3 раза. По окончании процесса получают три хроматографических пятна. Поочередно рассчитывают площадь каждого пятна. По результатам измерения площади пятен растворов с различной точно известной концентрацией и пятна анализируемого раствора с неизвестной концентрацией строят градуировачный график в координатах «S – lg c». По найденному значению S_x находят концентрацию определяемого вещества на градуировочном графике.
По такой же методике приготавливаются растворы веществ дихромата аммония, сульфата железа (+2) и находятся молярные концентрации по градуировачному графику. Повторность каждого эксперимента равна трем.


4. Результаты исследования

Таблица 2. Молярные концентрации и площади хроматографических пятен растворов хлорида меди (+2)

Показатели	Анализируемые растворы заданной и неизвестной концентрации
	1	2	3 (Х)
1. Масса вещества (г)	0,50	0,60	- (0,44)
2. Объем воды (л)	0,05	0,05	0,05
3. Молярные концентрации (моль/л)	7,40 ∙ 10-2	8,90 ∙ 10-2	(5,71 ∙10-2)
4. Десятичный логарифм молярной концентрации	- 1,13	- 1,05	(-1,234)
5. Площади хроматографического пятна (мм2)	75,00 78,00 72,00	94,00 97,00 94,00	49,00 47,00 51,00
6. Среднее значение площади хроматографического пятна (мм2)	75,00	95,00	49,00

Таблица 3. Молярные концентрации и площади хроматографических пятен растворов дихромата аммония

Показатели	Анализируемые растворы заданной и неизвестной концентрации
	1	2	3 (Х)
1. Масса вещества (г)	0,20	0,30	(1,17)
2. Объем воды (л)	0,02	0,02	0,02
3. Молярные концентрации (моль/л)	6,40 ∙ 10-2	9,60 ∙ 10-2	(5,70 ∙ 10-2)
4. Десятичный логарифм молярной концентрации	-1,19	-1,01	(-1,24)
5. Площади хроматографического пятна (мм2)	615 611 622	675 671 791	594 592 605
6. Среднее значение площади хроматографического пятна (мм2)	616	679	597

Данные показывают, что при концентрации раствора хлорида меди 7,40 ∙ 10^-2 моль/л, среднее значение площади хроматографического пятна равна 75 мм², а при концентрации раствора 8,9 ∙ 10^-2 моль/л, площадь пятна – 95 мм². Площадь раствора хлорида меди (+2) неизвестной концентрации равна 49 мм². При меньшей площади пятна должна быть меньше концентрация раствора, что и следует из графика. По графику десятичный логарифм концентрации раствора равен (- 1,234), значит молярная концентрация равна 5, 71 ∙ 10^-2 моль/л.

Анализируя данные таблицы №3, следует, что при концентрации раствора

дихромата аммония равной 6, 40 ∙ 10^-2 моль/л площадь пятна на хроматограмме равна 616 мм²_, а при концентрации раствора 6, 40 ∙ 10^-2 моль/л, площадь равна 679 мм². Площадь раствора дихромата аммония неизвестной концентрации равна 597 мм². Следовательно, при меньшей площади пятна должна быть меньше концентрация раствора, что показывает график (рис. 7.). По графику десятичный логарифм концентрации равен (-1,24), значит молярная концентрация равна 5, 70 ∙ 10^-2 моль/л.

Мы видим, что площади хроматографических пятен и интенсивность их окраски взаимосвязаны.

Те же результаты получились в следующем исследовании с сульфатом железа (+2).

По результатам исследования можно сделать следующие выводы:

1. Чем больше площадь пятна на хроматограмме, тем интенсивнее окраска пятна, тем больше концентрация растворов исследуемых растворов

2. По графику, который носит название градуировочный, можно найти молярную концентрацию раствора вещества, зная площадь его пятна на хроматограмме.

Заключение
В ходе эксперимента:

● визуально выявлены на хроматограмме зоны веществ разной молярной концентрации [были взяты растворы веществ CuCl₂ , (NH)₄ Cr₂O₇ , FeSO₄]

● поочередно рассчитаны площади каждого хроматографического пятна с помощью масштабно – координатной бумаги

● было сделано сравнение интенсивности окраски пятен на хроматограмме

● сделаны фотографии хроматографических пятен

● составлены таблицы 2, 3, 4 с занесением молярных концентраций исследуемых растворов и площадей их хроматографических пятен

● по результатам найденных площадей пятен растворов известных концентраций и площади пятна раствора неизвестной концентрации, построены градуировачные графики (рисунки 4,5) в координатах «площадь пятна – десятичный логарифм молярной концентрации»

● по построенным графикам были найдены молярные концентрации исследуемых веществ CuCl₂ , (NH)₄ Cr₂O₇ , FeSO₄

● для выявления пятен растворов FeSO₄ после высушивания бумага была обработана соответствующим экстрагентом - реактивом красной кровяной солью K₃ [Fe(CN)₆], так как это комплексное соединение является реактивом на катион железа Fe²⁺

FeSO₄ + K₃ [Fe(CN)₆] = KFe[Fe(CN)₆]↓ + K₂SO₄

● экспериментально была подтверждена прямая зависимость площади пятна на хроматограмме и интенсивности его окраски, площади пятна и концентрации раствора.

Список литературы
1. Васильев В.П. Аналитическая химия. Книга 2. Физико-химические методы анализа. М.: Дрофа, 2007

2. Васильев В.П., Морозов Р.П., Кочергина Л.А., Практикум по аналитической химии. М.: Химия, 2000

3. Золотов Ю.А. Основы аналитической химии. Практическое руководство. М.: Высшая школа, 2001

4. Ивановская Е.А., Пашкова Л.В., Евтухова Е.Н. Практикум по аналитической химии. Новосибирск: Сибмедиздат, 2004

5. Крешков А.П., Ярославцева А.А. Курс аналитической химии. Качественный анализ. Книга первая. М.: Химия, 1981

6. Фрайфеллер Д. Физическая биохимия. М.: Мир, 1980