Лекция 7.(2ч.).

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ

НАСЛЕДСТВЕННОСТИ
Хромосома представляет собой нуклеопротеидную структуру (дезоксинуклеопротеид), в состав которой входит дезоксирибо-нуклеиновая кислота, основные белки — гистоны, негистоновые белки и небольшое количество рибонуклеиновой кислоты. Веду­щая роль в наследственности принадлежит ДНК, которая яв­ляется носителем наследственной информации практически у всех организмов, как прокариот, так и эукариот, за исключени­ем некоторых РНК-содержащих вирусов.

Наследственная информация осуществляется при участии рибонуклеиновых кислот.

Нуклеиновые кислоты — материальные носители наследст­венной информации. Нуклеиновые кислоты были открыты Фрид­рихом Мимером (1844—1895 гг.) в 1869 г. Из ядер клеток чело­века он выделил вещество, названное им нуклеином (от лат» nucleus — ядро). В дальнейшем были изучены строение и молеку­лярная структура нуклеина и установлено, что он представлен двумя типами нуклеиновых кислот — дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК), локализованной преимущественно в ядре, и рибонуклеиновой кислотой (РНК), находящейся в ядре и ци­топлазме.

Раскрытию ведущей роли нуклеиновых кислот, особенно ДНК, в наследственности предшествовали экспериментальные работы Ф. Гриффитса. Он наблюдал в 1928 г. изменение на­следственного признака у бактерий пневмококков (Diplococcus pneumoniae). У этого вида имеется несколько штаммов, в том числе штаммы S и R. Штамм S вызывает гибель животных от пневмонии. Он имеет полисахаридную слизистую капсулу и образует гладкие колонии. Штамм R — авирулентный, капсулы не имеет и образует шероховатые колонии. Ф. Гриффите зара­жал мышей смесью живых бескапсульных бактерий R-штамма и убитых нагреванием капсульных пневмококков S-штамма. Мы­ши заболевали пневмонией и погибали, а выделенные из них живые клетки были как R -, так и S-штаммов. Следовательно, произошло превращение (трансформация) некоторых бескап­сульных бактерий R-штамма в вирулентные капсульные бакте­рии S-штамма,

В 1944 г. американский микробиолог О. Эвери с со­трудниками повторил экспери­мент Ф. Гриффитса. Из бакте­рий штамма S он выделил ДНК и внес ее в питательную среду, на которой размножа­лись бактерии авирулентного штамма R.

Значительная часть авирулентных бескапсульных бак­терий R -штамма трансфор­мировалась в капсульные вирулентные бактерии S-штамма. Это явление дало Эвери основание утверждать о ведущей роли ДНК в переносе наследственной инфор­мации от одного штамма бактерий к другому и послужило на­чалом разработки молекулярной теории наследственности.

Явление трансформации в последующие годы было доказано у са­мых различных видов бактерий, у дрожжей, а также у много­клеточных организмов. Так, доминантный ген темной окраски яиц (грены) от одной породы тутового шелкопряда был трансфор­мирован насекомым другой породы, имеющим белую окраску яиц.

В 1952 г. Н. Циндлер и Дж. Ледерберг открыли явление трансдукции. Трансдукцией называют перенос наследственной информации в виде фрагмента ДНК вирусами (бактериофага­ми) от одного штамма бактерий (донора) другому (реципиен­ту) и включение этого фрагмента в генотип реципиента. Явле­ние трансдукции было открыто на тифозных бактериях, (Salmo­nella typhimurium). В U-образную трубку, разделенную посре­дине бактериальным фильтром (рис. 30), были помещены бак­терии штамма 22А, не способные синтезировать аминокислоту триптофан (Т^-), и бактерии штамма 2 А, способные синтезиро­вать данную аминокислоту (Т ⁺). В среду был внесен бактерио­фаг, и после совместного культивирования некоторые клетки штамма 22А приобрели способность синтезировать триптофан. Таким образом было доказано, что бактериофаги могут являть­ся переносчиками наследственной информации от бактерий од­ного штамма бактериям другого штамма.

Американский ученый Хейши совместно с М. Чейзом в 1952 г. размножали ДНК-содержащий вирус — бактериофаг Т-2 на среде, содержащей радиоактивные серу и фосфор, что позволило пометить ДНК фага радиоактивным фосфором Р³⁵, а белковую оболочку фага — радиоактивной серой S³³. При заражении бактерий данными фагами в них попадала только меченая ДНК, а белковая оболочка, меченная радиоактивной серой, оставалась снаружи. В зараженной клетке образовалось множество вирионов фага, Следовательно, генетическая инфор­мация, необходимая для синтеза ДНК фагов, содержится в ДНК проникших в клетку вирусов.

Дезоксирибонуклеиновая кислота — ДНК — является уни­кальным носителем наследственной информации как у прока­риотов, так и у эукариотов. Только у некоторых форм простей­ших вирусов наследственная информация закодирована не в ДНК, а в рибонуклеиновой кислоте.

Доказательством ведущей роли ДНК в наследственности яв­ляется то, что, она локализована главным образом в хромосо­мах, поэтому молекулярная генетика не противоречит хромо­сомной теории наследственности и законам классической гене­тики. Количество ДНК в клетках каждого организма относительно постоянно, причем в половых клетках — гаметах — коли­чество ее в два раза меньше, чем в соматических, что соответст­вует поведению хромосом в мейозе и при оплодотворении. Од­ним из главнейших свойств ДНК является ее способность само­удваиваться (реплицироваться) в интерфазе митотического цикла, благодаря чему в каждой клетке многоклеточного орга­низма сохраняется полный объем наследственной информации. ДНК относительно константна.

Особенности строения молекулы ДНК свидетельствуют об ее исключительном многообразии, видовой и индивидуальной специфичности. Изменение в строении молекулы ДНК обуслов­ливает изменение признака или свойства организма.

Строение молекулы ДНК. ДНК — сложный биополимер, со­стоящий из 10⁸ нуклеотидов и более. Каждый нуклеотид вклю­чает три компонента — остаток фосфорной кислоты (фосфат), пентозный сахар — дезоксирибозу и одно из четырех азотистых оснований: пуриновых — аденин или гуанин — либо пиримидиновых — тимин или цитозин.

Специфичность каждого нуклеотида в молекуле ДНК опре­деляется наличием соответствующего азотистого основания, по­этому нуклеотиды принято обозначать начальными буквами азотистых оснований: А — аденин, Г — гуанин, Т — тимин, Ц — цитозин. Нуклеотиды соединяются между собой, образуя длинную цепочку,

химическим остовом, которой служат остат­ки фосфорной кислоты, кото­рые связаны фосфодиэфирными связями с 5' углеродом одной молекулы пентозного сахара и 3' углеродом другой (рис. 31). К первому атому углерода каждой молекулы пентозного сахара присоединяется одно из четырех азотистых оснований. Благодаря такому соедине­нию нуклеотидов молекула ДНК обладает полярностью: реп­ликация ДНК на матричной нити идет в направлении от 5'к 3'. Структурная формула молекулы ДНК была установлена в 1953 г. Д. Уотсоном и Ф. Криком (рис. 32). Молекула ДНК со­стоит из двух цепочек нуклеотидов, соединенных комплемен­тарно. Каждый нуклеотид одной цепочки соединяется водород­ными связями с нуклеотидом другой цепочки строго закономер­но: аденин соединяется с тимином, гуанин — с цитозином. Аденин соединяется с тимином двумя, а цитозин с гуанином — тре­мя водородными связями. Число пурииовых нуклеотидов (А+ +Г) равно числу пиримидиновых Ц+Т, то есть отношение (А+ +Г) : (Т+Ц) =1. Две комплементарные нити образуют правовинтовую спираль, каждый виток которой имеет длину 3,4 нм, расстояние между нуклеотидами 0,34 нм. Азотистые основания ориентированы к середине спирали. Для хромосом эукариотов характерно линейное строение молекулы ДНК, у прокариотов, плазмид, митохондрий и пластид молекулы ДНК бывают замк­нуты в кольцо.

Видовая специфичность молекулы ДНК. Число нуклеотндов и их последовательность в молекуле ДНК специфичны для каж­дого вида и частично — для каждой особи. Д. Уотсон ввел по­нятие о видовой специфичности ДНК. Коэффициентом видовой

специфичности называют соотношение . Молекула ДНК

обладает исключительным многообразием. Если, предположить, что у млекопитающих в ДНК содержится 10⁸ нуклеотидов, то число молекул ДНК, различающихся по порядку чередования нуклеотидов, будет 4 в степени 10⁸. Таким образом, в молекуле ДНК доожет быть записан практически любой объем наследст­венной информации и у каждой особи эта запись уникальна и специфична.

Репликация молекулы ДНК. Репликацией называют процесс самокопирования молекулы ДНК с точным соблюдением поряд­ка чередования нуклеотидов, присущего исходным комплемен­тарным нитям.

У многоклеточных организмов в результате слияния гамет при оплодотворении образуется зигота, в которой содержится наследственная информация гаплоидных геномов родительских особей. В онтогенезе из зиготы в результате митоза образуются миллиарды клеток, каждая из которых несет в себе всю генети­ческую информацию. Об этом свидетельствует тот факт, что у многих видов растений — табака, картофеля, бегонии, моркови и других — из одной клетки, взятой из корня, листа, клубня или другого органа, можно получить целое растение, имеющее ха­рактерные признаки исходного. Это возможно благодаря тому, что молекула ДНК способна к самовоспроизведению в процес­се репликации.

Репликация происходит в период синтеза (5-период) интер­фазы митотического цикла. На отдельных участках молекулы ДНК образуются так называемые вилки репликации. В этих местах водородные связи между азотистыми основаниями под действием соответствующих ферментов разрываются, компле­ментарные нити разъединяются и каждая из них становится мат­рицей, на которой происходит синтез дочерних нитей. Такой тип репликации получил название полуконсервативного; он был убе­дительно доказан в опытах М. Мезельсон и,Ф. Сталь (1958) на бактериях Е. coli и Дж. Тейлором на проростках семян кормо­вых бобов Vicia faba.

Бактерии кишечной палочки сначала выращивали на среде, содержащей тяжелый изотоп азота —N¹⁵. Затем они были перенесены на среду, содер­жащую только N¹⁴. Через определенные промежутки времени из клеток вы­деляли ДНК и с помощью центрифугирования в соответствующем растворителе разделяли на фракций. Молекулы ДНК, выделенные из исходных бактерий, содержали изотоп N¹⁵. По мере роста бактерий на среде, содержащей N¹⁴, сначала в ДНК содержались нити, одна из которых включала N¹⁴, другая — N¹⁵, а затем наряду с молеку­лами, нити которых содержали N¹⁴+N¹⁶, поя­вились молекулы ДНК, содержащие только N¹⁴ (рис. 33).

Дж. Тейлор для доказательства полуконсервативного типа репликации ДНК исполь­зовал метод радиоавтографии. Сначала семе­на конских бобов проращивали на среде, содержащей тимидин, меченный тритием — Н³. Затем корешки проростков, в клетках ко­торых содержались хромосомы, меченные Н³, переносили в среду, не содержащую радио­активный тимидин. В первом митозе каждая хроматида содержала Н³, во втором одна из двух хроматид была меченой, другая не со­держала Н³. В третьем митозе только часть хромосом содержала одну хроматиду, мечен­ную Н³. Впоследствии эти данные были подтверждены исследованиями, проведенными на культуре клеток растений, животных и человека.

Процесс репликации протекает при участии комплекса фер­ментов, главнейшие из которых получили название ДНК-полимераз, одновременно на двух комплементарных нитях. Участок молекулы ДНК в том месте, где начали расплетаться компле­ментарные нити, называются вилкой репликации. Она образу­ется у прокариот, плазмид, митохондрий и пластид в одной определенной, генетически фиксированной точке. В молекуле ДНК у эукариот таких «стартовых точек» бывает несколько.

У эукариот на каждой комплементарной нити ДНК процесс репликации идет неодинаково, так как они антипараллельны, поэтому одна из нитей называется «лидирующей», другая — «запаздывающей». «Лидирующая» нить синтезируется от 5' конца к 3' при участии фермента ДНК-полимеразы в виде сплошной комплементарной нити (рис. 34).

Синтез «запаздывающей» нцти протекает сложнее с участи­ем комплекса ферментов. Вначале образуются отрезки — реп­лики новой дочерней нити ДНК, прочное соединение которых осуществляет фермент лигаза. Эти отрезки новой нити ДНК со­держат у эукариот 100 — 200 нуклеотидов, у прокариот — 1000 — 2000 нуклеотидов. Их называют фрагментами Оказаки по имени описавшего их японского ученого.

Репликация кольцевых молекул ДНК у прокариот, а также ДНК плазмид, митохондрий и пластид протекает по типу, по­лучившему название «катящегося обруча». При этом одна из нитей молекулы ДНК разрывается и ее конец прикрепляется к клеточной мембране, а на противоположном конце, как на мат­рице, происходит синтез дочерней нити ДНК.

Репликация ДНК протекает довольно быстро, У бактерий она составляет около 30 мкм в минуту; за это время к нити-матрице присоединяется около 500 нуклеотидов дочерней нити. У вирусов — около 900 нуклеотидов в минуту. У эукариот реп­ликация протекает медленнее — дочерняя нить удлиняется на 1,5 — 2,5 мкм в минуту.

Таким образом, ДНК способна самовоспроизводиться (реплицироваться, самокопироваться) и сохранять наследствен­ную информацию, закодированную в ней в виде последователь­ности чередования нуклеотидных оснований, во множестве по­колений клеток, образующихся в онтогенезе многоклеточного организма.

Реализация наследственной информации. Наследственная информация, закодированная в молекуле ДНК, реализуется на всех этапах жизнедеятельности клетки и многоклеточного орга­низма в процессе биосинтеза. Основанием для доказательства реализации наследственной информации в процессе биосинтеза послужили исследования американских ученых Дж. Бидла и Э. Л. Татума в 1941—1944 гг., которыми были получены мутантные штаммы плесневого гриба нейроспоры. Их различие состояло в утрате способности к синтезу той или иной амино­кислоты и потере свойства синтезировать соответствующий фер­ментативный белок. Исследования показали, что каждый ген контролирует синтез одного соответствующего фермента («один ген — один фермент») и реализация наследственной информа­ции осуществляется в процессе синтеза. Ген, локализованный на определенном участке молекулы ДНК, контролирует синтез первичной молекулы белка, представляющей собой полипептидную цепь, специфичность которой зависит от порядка чере­дования в ней аминокислот.

Белкам принадлежит исключительно важная роль в жизне­деятельности каждой клетки и всего многоклеточного организ­ма. Они участвуют в построении мембран, хроматина, рибосом, митохондрий, являются составной частью сложных белков. В качестве ферментов и гормонов они управляют всеми про­цессами в клетке и в многоклеточном организме. Подавляющее большинство метаболических реакций, от которых зависит раз­витие признака или свойства, находится под контролем фермен­тов и, следовательно, генов.

Химическая структура белковых молекул. Первичная моле­кула белка представляет собой цепочку, состоящую из 100 — 300 различных аминокислот и более, порядок чередования кото­рых определяет специфичность данной молекулы (рис. 35): каждая из 20 аминокислот может встречаться многократно, но местонахождение контролируется ДНК. В настоящее время для многих молекул белка установлена их первичная структура, то есть порядок чередования аминокислот в полипептидной цепи.

Вторичная структура белковой молекулы зависит от пер­вичной: аминокислоты в полипептидной цепи соединяются во­дородными связями между NH- и СО - группами, в результате чего она свертывается в так называемую альфа-спираль. Обра­зование больших альфа-спиральных участков характерно для фибриллярных белков. В молекулах ферментов спиралеобраз­ных участков значительно меньше (рис. 36)

Третичная структура белковых молекул образуется в ре­зультате связывания так называемыми дисульфидными мости­ками (S—S) двух цистеиновых остатков аминокислот. Это оп­ределяет специфическое пространственное расположение полипептидных цепей.

Четвертичная структура белковых молекул характеризуется тем, что они состоят из двух — четырех различных, стабильно соединенных полипептидных цепей. Такая структура характер­на для глобулярных белков, в том числе и для многих фер­ментов.

Вторичная, третичная и четвертичная структуры белковых молекул зависят от числа и порядка чередования аминокис­лот в полипептидной цепи, то есть от первичной структуры. Процесс синтеза белка в клетке называется биосинтезом. Он осуществляется под контролем молекулы ДНК, которая таким образом реализует закодированную в ней наследственную ин­формацию. Схематично реализацию наследственной информа­ции можно представить следующим образом:

Биосинтез. Процесс реализации наследственной информации в биосинтезе осуществляется при участии трех видов рибонуклеи­новых кислот: информационной (матричной) — иРНК (мРНК), рибосомальной — рРНК и транспортной — тРНК. Все рибонук­леиновые кислоты синтезируются на соответствующих участках молекулы ДНК. Они имеют значительно меньшие размеры, чем ДНК, и представляют собой одинарную цепь нуклеотидов. Нуклеотиды содержат остаток фосфорной кислоты (фосфат), пентозный сахар (рибозу) и одно из четырех азотистых основа­ний— аденин, цитозин, гуанин и урацил. Азотистое основание— урацил — комплементарно аденину.

Процесс биосинтеза сложный и включает ряд этапов — транскрипцию, сплайсинг и трансляцию.

Первый этап называется транскрипцией. Он происходит в ядре клетки: на участке определенного гена молекулы ДНК синтезируется мРНК. Этот синтез осуществляется при участии комплекса ферментов, главным из которых является ДНК-за­висимая РНК-полимераза, которая прикрепляется к начальной (инициальной) точке молекулы ДНК, расплетает двойную спираль и, перемещаясь вдоль одной из нитей, синтезирует ря­дом с ней комплементарную нить мРНК. В результате транс­крипции мРНК содержит генетическую информацию в виде по­следовательного чередования нуклеотидов, порядок которых точно скопирован с соответствующего участка (гена) молекулы ДНК.

Дальнейшие исследования показали, что в процессе транс­крипции синтезируется так называемая про-мРНК — предше­ственник зрелой мРНК, участвующей в трансляции. Про-мРНК имеет значительно большие размеры и содержит фрагменты, не кодирующие синтез соответствующей полипептидной цепи. В ДНК наряду с участками, кодирующими рРНК, тРНК и по­липептиды, имеются фрагменты, не содержащие генетической информации. Они получили название интронов в отличие от ко­дирующих фрагментов, которые называются экзонами. Интроны обнаружены на многих участках молекул ДНК. Так, напри­мер, в одном гене — участке ДНК, кодирующем овальбумин ку­рицы, содержится 7 интронов, в гене сывороточного альбумина крысы — 13 интронов. Длина интрона бывает различной — от двухсот до тысячи пар нуклеотидов ДНК. Интроны считываются (транскрибируются) одновременно с экзонами, поэтому про-мРНК значительно длиннее, чем зрелая мРНК. В ядре в про-мРНК специальными ферментами вырезаются интроны, а фрагменты экзона «сращиваются» между собой в строгом по­рядке. Этот процесс называется сплайсингом. В процессе сплайсинга образуется зрелая мРНК, которая содержит только ту информацию, которая необходима для синтеза соответству­ющего полипептида, то есть информативную часть структурно­го гена.

Значение и функции интронов до сих пор еще не совсем вы­яснены, но установлено, что, если в ДНК считываются только участки экзонов, зрелая мРНК не образуется. Процесс сплай­синга изучен на примере работы гена овальбумина. Он содер­жит один экзон и 7 интронов. Сначала на ДНК синтезируется про-мРНК, содержащая 7700 нуклеотидов. Затем в про-мРНК

число нуклеотидов уменьшается до 6800, затем — до 5600, 4850, 3800, 3400 и т. д. до 1372 нуклеотидов, соответствующих экзону. Содержащая 1372 нуклеотида мРНК выходит из ядра в цито­плазму, попадает на рибосому и синтезирует соответствующий полипептид.

Следующий этап биосинтеза — трансляция — происходит в цитоплазме на рибосомах при участии тРНК.

Транспортные РНК синтезируются в ядре, но функциониру­ют в свободном состоянии в цитоплазме клетки. Одна молеку­ла тРНК содержит 76 — 85 нуклеотидов и имеет довольно слож­ную структуру, напоминающую клеверный лист (рис. 37). Три участка тРНК имеют особо важное значение 1) антикодон, состоящий из трех нуклеотидов, определяющий место прикреп­ления тPHK к соответствующему комплементарному кодону (мРНК) на рибосоме; 2) участок, определяющий специфичность тРНК, способность данной молекулы прикрепляться толь­ко к определенной аминокислоте; 3) акцепторный участок, к ко­торому прикрепляется аминокислота. Он одинаков для всех тРНК и состоит из трех нуклеотидов — Ц—Ц—А. Присоедине­нию аминокислоты к тРНК предшествует ее активация фермен­том аминоацил-тРНК-синтетазой. Этот фермент специфичен для каждой аминокислоты Активированная аминокислота прикреп­ляется к соответствующей тРНК и доставляется ею на рибо­сому.

Центральное место в трансляции принадлежит рибосомам— рибонуклеопротеиновым органоидам цитоплазмы, во множест­ве в ней присутствующим. Размеры рибосом у прокариот в среднем 30X30x20 нм, у эукариот — 40X40X20 нм. Обычно их размеры определяют в единицах седиментации (S) — скоро­сти осаждения при центрифугировании в соответствующей сре­де. У бактерии кишечной палочки рибосома имеет

величину 70S и состоит из двух субчастиц, одна из которых имеет константу 30S, вторая 505, и содержит 64% рибосомальной РНК и 36% белка.

Молекула мРНК выходит из ядра в цитоплазму и прикреп­ляется к малой субчастице рибосомы. Трансляция начинается с так называемого стартового кодона (инициатора синтеза) — А —У—Г— Когда тРНК доставляет к рибосоме активирован­ную аминокислоту, ее антикодон соединяется водородными свя­зями с нуклеотидами комплементарного кодона мРНК. Акцеп­торный конец тРНК с соответствующей аминокислотой при­крепляется к поверхности большой субчастицы рибосомы. Пос­ле первой аминокислоты другая тРНК доставляет следующую аминокислоту, и таким образом на рибосоме синтезируется полипептидная цепь. Молекула мРНК обычно работает сразу на нескольких (5—20) рибосомах, соединенных в полисомы. Нача­ло синтеза полипептидной цепи называют инициацией, рост ее — элонгацией. Последовательность аминокислот в полипеп­тидной цепи определяется последовательностью кодонов в мРНК. Синтез полипептидной цепи прекращается, когда на мРНК появляется один из кодонов-терминаторов — УАА, УАГ или УГА. Окончание синтеза данной полипептидной цепи назы­вается терминацией (рис. 38).

Установлено, что в клетках животных полипептидная цепь за одну секунду удлиняется на 7 аминокислот, а мРНК продвигается на рибосоме на 21 нуклеотид.


У бактерий этот процесс протекает в два-три раза быстрее.

Следовательно, синтез первичной структуры белковой мо­лекулы— полипептидной цепи — происходит на рибосоме в со­ответствии с порядком чередования нуклеотидов в матричной рибонуклеиновой кислоте — мРНК. Она не зависит от строения рибосомы.

Генетический код. Кодом наследственности или генетичес­ким кодом называется процесс перевода триплетной последова­тельности нуклеотидов молекулы ДНК в последовательность аминокислот в белковой молекуле. Одним из важнейших свойств генетического кода является его колинеарность — чет­кое соответствие между последовательностями кодонов нуклеи­новых кислот и аминокислотами полипептидных цепей (табл.2).

Важное значение для раскрытия генетического кода имели исследования М. Ниренберга и Дж. Маттеи, а затем С. Очао с сотрудниками, начатые ими в 1961 г. в США. Они разработали метод и экспериментально установили последовательность нуклеотидов в кодонах мРНК, контролирующая местоположение данной аминокислоты в полипептидной цепи. В бесклеточную среду, содержащую все аминокислоты, рибосомы, тРНК, АТФ и ферменты, Ниренберг и Маттеи вводили искусственно синтези­рованный биополимер типа мРНК, представляющий собдй це­почку одинаковых нуклеотидов — УУУ — УУУ — УУУ — УУУ — и т. д. Биополимер кодировал синтез полипептидной цепи, содержащей только одну аминокислоту — фенилаланин; такая цепь называется полифенилаланином. Если мРНК состояла из кодонов, содержащих нуклеотиды с азотистым основанием ци-тозин, то синтезируется полипептидная цепь, содержащая аминокислоту пролин, — полипролин. Искусственные полимеры мРНК, содержащие кодоны АГУ, синтезировали полипептид­ную цепь из аминокислоты серии — полисерин и т. д. Этот ме­тод позволил в начале 60-х годов полностью расшифровать ге­нетический код и определить его свойства (табл. 3),

следующая страница>