На правах рукописи
КАЗАКОВА СВЕТЛАНА БОРИСОВНА
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ И РАСТИТЕЛЬНЫХ СЕЛЕКТИВНЫХ МОДУЛЯТОРОВ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ ПРИ ЦИКЛИЧЕСКИХ КОЛЕБАНИЯХ И ДЕФИЦИТЕ ЭСТРОГЕНОВ
14.00.25 – фармакология, клиническая фармакология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург – 2009 г.
Работа выполнена в отделе нейрофармакологии им. С.В. Аничкова Научно-исследовательского института экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН (НИИЭМ СЗО РАМН).
Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ,
член-корреспондент РАМН,
доктор медицинских наук,
профессор
Сапронов Николай Сергеевич
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор
Клименко Виктор Матвеевич
доктор медицинских наук, профессор
Шабанов Петр Дмитриевич
Ведущая организация: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. Академика И.П. Павлова
Защита состоится «….» ……………………2010 года в ….часов на заседании совета Д 001.022.03 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора и кандидата наук при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика И. П. Павлова, 12
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НИИЭМ СЗО РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д.12
Автореферат разослан «….»…………..2010 года.
Ученый секретарь диссертационного совета
Доктор биологических наук, профессор Л.В. Пучкова
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Не вызывает сомнений, что эстрогены оказывают модулирующее влияние на когнитивный и психо-эмоциональный статус. Вынужденная или естественная гипоэстрогения часто сопровождается комплексом расстройств, включая подавленное настроение, тревогу, плаксивость, депрессию. Наиболее часто прослеживается корреляция между гормональным фоном и развитием аффективных расстройств в пубертатный период, при использовании пероральной контрацепции, во время предменструального синдрома, при беременности, в послеродовом климактерическом периоде. В основе патогенеза развития аффективного статуса лежит тесная взаимосвязь между гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой и нейромедиаторными системами головного мозга. Эстрогены оказывают модулирующее действие на холинергическую, дофаминергическую, серотонинергическую системы, способствуя развитию антиамнестического, антидепрессивного, анксиолитического эффектов. Кроме того, Bruse McEwen (1999, 2002) в условиях доклинических исследований продемонстрировал зависимость между синаптогенезом в нейронах гиппокампа и колебанием уровня эстрадиола в крови в течение эстрального цикла у крыс, что свидетельствует о нейропротективном действии эстрогенов. В настоящее время для купирования менопаузальных симптомов, для лечения пациенток после гистерэктомии, а также в качестве пероральной контрацепции широко используется заместительная гормональная терапия (ЗГТ). Однако применение ЗГТ связано с риском развития масталгии (болезненность молочных желез), пролиферации тканей молочной железы и эндометрия, что провоцирует развитие опухолей, маточного кровотечения, а длительное использование гормональной терапии может привести к венозной тромбоэмболии и патологическим изменениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах (Сапронов, Федотова, 2009). Поэтому возникает необходимость поиска новых лекарственных препаратов для коррекции психоэмоционального статуса в условиях естественного или вынужденного дисбаланса эстрогенов. Альтернативой ЗГТ выступает класс фармакологически активных веществ – селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (СЭРМ), – проявляющие избирательную активность в эстроген-чувствительных тканях, в том числе в ЦНС. СЭРМ это соединения, которые, в отличие от «чистых» агонистов и антагонистов эстрогенов, способны проявлять селективную избирательность к эстрогеновым рецепторам. Пока остается неясным, по какому механизму СЭРМы реализуют агонист/антагонистические эффекты в эстроген – чувствительных тканях. Однако наиболее вероятны 3 механизма действия: различной экспрессией рецептора эстрогена в ткани-мишени; разной конформацией эстрогенового рецептора и чувствительного к нему лиганда; различной экспрессией и образованием корегуляторных белков на рецепторе эстрогенов. Существуют противоречивые сведения и об эффектах СЭРМ на поведенческие процессы, аффективный статус. Очень мало исследований анализируют роль СЭРМов в формировании гормонального статуса при их длительном применении. Таким образом, особую актуальность представляет вопрос о взаимодействии гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы и нейромедиаторных систем головного мозга, участвующих в формировании эмоционального поведения и когнитивного статуса, на фоне хронического введения СЭРМ синтетического и растительного происхождения при циклических колебаниях половых гормонов и при дефиците эстрогенов.
Целью настоящей работы являлся сравнительный анализ эффектов агонистов\антагонистов эстрогеновых рецепторов, введенных изолированно или в комбинации с 17α-Э2 и с 17β-Э2, на депрессивноподобное и тревожное поведение у самок крыс, а также определение их гормонального статуса при естественном колебании эстрогенов в крови и в условиях экспериментального дефицита эстрогенов.
В задачи исследования входило:
1. Выяснить участие α- и β-эстрогеновых рецепторов (ЭР) в механизмах развития депрессии и тревожных расстройств при экспериментальном дефиците эстрогенов;
2. Изучить возможность применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов для коррекции аффективных состояний при вынужденном или естественном дефиците эстрогенов;
3. В эксперименте на животных оценить перспективность сочетанного применения СЭРМ в комбинации с высокочувствительным лигандом к α-ЭР - 17α-Э2, или в комбинации с лигандом к β-ЭР - 17β-Э2 в терапии депрессивных и тревожных состояний в условиях овариоэктомии;
4. Провести сравнительный анализ поведенческих эффектов 17α- и 17β-Э2, а также синтетических (тамоксифен) и растительных (экстракт цимицифуги, генистейн) модуляторов ЭР при дисбалансе половых гормонов.
Научная новизна. Впервые показано влияние ряда СЭРМ (тамоксифен, генистейн, климадинон) на аффективное поведение и гормональный статус при естественных колебаниях эстрогенов, а также в условиях экспериментального дефицита у самок крыс. Продемонстрированы разнонаправленные эффекты исследуемых препаратов и заместительной терапии 17α- и 17β-Э2 на депрессивное поведение и уровень тревожности у интактных и ОЭ самок крыс. Показано, что тамоксифен, генистейн и климадинон изолированно и в сочетании с 17α- и 17β-Э2 способны модулировать аффективный статус и баланс половых гормонов у животных. Установлено, что эффекты изолированного и сочетанного применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов различаются у ОЭ крыс и интактных самок.
Научно-практическое значение работы. Полученные результаты расширяют представления об участии половых гормонов в патогенезе депрессии и тревожных расстройств. Кроме того, показана корреляция между степенью вовлечения α- и β-ЭР, их физиологической активностью, а также уровнем циркулирующих в крови экзогенных и эндогенных лигандов к этим рецепторам и тревожно-депрессивным состоянием у грызунов. Результаты работы могут быть использованы для разработки схем лечения аффективного состояния при дисбалансе и дефиците половых гормонов у пациенток. Показана перспективность применения СЭРМ в комбинации с эстрогенами для лечения психоэмоциональных расстройств на фоне различных патологий репродуктивной системы.
Основные положения, выносимые на защиту: Естественные колебания эстрогенов на протяжении эстрального цикла у крыс сопровождаются изменением уровня тревожности и депрессивноподобного состояния. Как высокое содержание эстрогенов, так и низкое приводит к развитию тревожно-депрессивного состояния у грызунов. Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов вовлекаются в формирование психо-эмоционального статуса. Экспериментальная овариоэктомия у крыс сопровождается нарушением аффективного статуса, что выражается изменениями в различных поведенческих тестах. Депрессивные и тревожные нарушения у ОЭ животных лишь частично снижаются на фоне заместительной терапии 17β-Э2. Применение 17β-Э2 и/или 17α-Э2 в комплексе с тамоксифеном, генистейном или климадиноном повышает эффективность антидепрессантной и анксиолитической терапии при дефиците эстрогенов. Важную роль при этом играет формирование гормонального статуса на фоне указанных комбинаций препаратов.
Личный вклад соискателя. Соискателем написан обзор литературы, спланированы и выполнены эксперименты, статистическая обработка и анализ полученных результатов, а также подготовлены основные публикации по теме работы.
Апробация работы. Результаты были доложены и обсуждались на 2-ой Российско-китайской научной конференции «Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике» (Пермь, 2006), 1-й конференции Российской ассоциации психонейроэндокринологии (2008), на научных заседаниях отдела нейрофармакологии (2008, 2009).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 3 статьи в рецензируемых журналах.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах, иллюстрирована 22 рисунками и 18 таблицами, включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, изложение результатов их обсуждение, а также заключение, выводы, список цитированной литературы, из которых 36 отечественных и 95 иностранных источников.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена на 740 самках крыс линии Вистар, массой 180-200 г (возраст 4-5 месяцев), полученных из питомника РАМН “Рапполово”. Животных содержали в стандартных условиях освещения и пищевого режима. Операцию тотальной овариоэктомии, взятие влагалищных мазков и поведенческие тесты проводили не ранее, чем через 7 дней после поступления из питомника.
Овариоэктомию осуществляли с соблюдением правил асептики. Методические особенности и детали операции подробно изложены у Я. Д. Киршенблата (1969). Отсутствие эстрального цикла у самок подтверждали анализом влагалищных мазков в течение 4-х дней до начала эксперимента.
Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок. Для анализа влияния разного уровня эндогенных эстрогенов определяли 4 фазы полового цикла: диэструс, проэструс, эструс и метэструс. Определение стадии полового цикла у интактных крыс проводили с использованием характерных морфологических признаков по мазкам согласно описанию у Я. Д. Киршенблата (1969).
Депрессивноподобное поведение изучали в тесте Порсолта. Животное помещали в стеклянный цилиндр (23/50 см), заполненный на две трети водой с температурой 25° на 15 минут, затем извлекали из цилиндра и обсушивали в течение 1 часа. Через 24 часа животное повторно опускали в воду. Депрессивноподобное состояние оценивали по длительности иммобильности в течение 5 минут. Под иммобильностью понимали полное отсутствие плавательных движений при пассивном удержании животного на воде (Porsolt et al., 1978). Уровень тревожности оценивали в «приподнятом крестообразном лабиринте», состоящем из двух «открытых» и двух «закрытых» рукавов. Животное помещали в центр лабинринта и регистрировали общее время пребывания и число заходов в открытые и закрытые рукава в течение 5 минут (File,1996; Калуев, 1998; Себенцова и др., 2005). Эмоциональную реактивность, двигательную и исследовательскую активность животных изучали в тесте «открытое поле» в течение 3 минут (Петров и др., 1982; Калуев, 2002). Тестирование проводили в 9.00 – 12.00 часов). Концентрацию ЛГ, ФСГ, Э2 и П в сыворотке крови крыс определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов для ИФА. Оптическую плотность измеряли при 450 нм с помощью анализатора иммуноферментных реакций АИФР-01 (ПИКОН, Россия). Перед началом исследования проводили раститровку наборов с подбором оптимального разведения сыворотки крови, концентрацию антигена в исследуемых образцах рассчитывали на основании калибровочного графика.
В работе использовали СЭРМы синтетического и растительного происхождения: тамоксифен – синтетического происхождения, (Орион, Финляндия) вводили в дозе 10 мг/кг, внутрибрюшинно; генистейн («Sigma», Германия) – препарат растительного происхождения, относится к классу изофлавоноидов, получен из соевых бобов, вводили в дозе 1 мг/кг, внутрибрюшинно; климадинон (Bionorica, Германия) – лекарственный препарат, представляющий собой экстракт цимицифуги, вводили в дозе 20 мг/кг, внутрибрюшинно. Фармакологические вещества вводили в объеме 0,1 мл на животное ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели после овариоэктомии. Необходимо отметить, что СЭРМы были использованы в поведенческих дозах, соответствующих данным литературы (Dhandapani, 2002; Diez-Perez, 2006). 17α- и 17β-эстрадиол растворяли в стерильном персиковом масле и вводили внутримышечно в дозе 0,5 мкг на каждое животное. В данном исследовании были использованы низкие дозы эстрадиолов (Wise, 2000). Контрольные животные получали физиологический раствор.
Все интактные и ОЭ животные были разделены на следующие группы по 18-20 особей в каждой: 1-я – интактные крысы, получавшие физиологический раствор на протяжении всего эксперимента (контроль 1); 2-я – интактные крысы, которым вводили 17α-Э2; 3-я – интактные самки, получавшие 17β-Э2; 4-я группа – интактные крысы, которым вводили тамоксифен; 5-я – интактные крысы, которым вводили генистейн; 6-я – интактные самки, получавшие климадинон; 7-я – ОЭ самки, получавшие масляный растворитель в эквивалентном объеме внутримышечно (контроль 2); 8-я группа – ОЭ самки, получавшие 17β-Э2; 9-я группа – ОЭ самки, получавшие 17α-Э2; 10-я группа – ОЭ крысы, которым вводили тамоксифен; 11-я группа – ОЭ самки, получавшие тамоксифен и 17β-Э2; 12-я группа – ОЭ самки, которым вводили тамоксифен и 17α-Э2; 13-я группа – ОЭ самки, получавшие генистейн; 14-я группа – ОЭ крысы, получавшие в комбинации генистейн и 17β-Э2; 15-я группа – ОЭ самки, которым вводили генистейн и 17α-Э2; 16-я группа – ОЭ животные, получавшие климадинон; 17-я группа – ОЭ крысы, которым вводили климадинон и 17β-Э2; 18-я группа – ОЭ самки, получавшие климадинон и 17α-Э2. Все интактные самки перед началом эксперимента внутри каждой группы были разделены по фазам цикла таким образом, что в каждой стадии эстрального цикла находилось 4 – 5 животных. Поведенческие тесты проводили через 1 час после последнего введения указанных препаратов. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакетов прикладных программ ‹‹SPSS 12.0 for Windows›› и ‹‹STATISTICA 6.0›› с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA; post-hoc: Fisher’s LSD test) и U-критерия Манна-Уитни (Mann-Whitney U) (Беленький, 1959; Платонов, 2000). Различия между значениями считали статистически значимыми при p < 0,05. Все значения были представлены в виде M ± S.E.M., где M – среднее арифметическое, S.E.M. – стандартная ошибка среднего арифметического (Standart Error Means).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Влияние эстрального цикла и гормональной терапии 17β- или 17α-эстрадиолом на аффективное поведение интактных самок крыс
Как показало исследование, показатели аффективного статуса в зависимости от фазы цикла. Депрессивное поведение проявляется в стадии ди - и проэструса и ослабляется в фазах эструса и метэструса. Наряду с депрессивным поведением уровень тревожности в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» наиболее высок в фазе проэструса и эструса. В тесте «открытое поле» показатели вегетативного стресса (груминг, дефекация) существенно не менялись на протяжении всего цикла (табл. 2). 17α-Э2 и 17β-Э2 (нарушал фазность цикла, все животные находились в эструсе) значительно повышали депрессивное поведение у крыс по сравнению с контролем 1 (рис. 1). В тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» анксиолитическая активность 17β-Э2 проявлялась в увеличении числа заходов в открытые рукава. В то же время, введение 17α-Э2 приводило к резкому снижению числа заходов в открытые рукава и сопровождалось реакцией замирания (поведенческий показатель, свидетельствующий о высоком уровне тревожности у животных) в фазах проэструса и эструса. Анксиолитический эффект 17α-Э2 проявлял в стадии диэструса и метэструса (табл.1). В тесте «открытое поле» 17α-Э2 и 17β-Э2 не оказывали влияния на пространственно-ориентировочную активность (табл. 2). Таким образом, циклические колебания половых гормонов в крови интактных крыс сопровождаются изменением аффективного статуса. Хроническое введение 17α-Э2 или 17β-Э2 приводило к изменению поведенческих реакций, регистрируемых в тесте Порсолта, «приподнятом крестообразном лабиринте» и открытое поле». Длительное введение 17β-Э2 сопровождается развитием анксиолитического эффекта у интактных самок (эструс). Хроническое введение 17α-Э2 интактным животным приводило к развитию анксиолитического действия в фазах диэструса и метэструса. В стадиях проэструса и эструса 17α-Э2 проявлял анксиогенные свойства.
Аффективный статус самок в условиях хронического введения СЭРМ
Влияние тамоксифена на аффективный статус интактных самок
Из рисунка 1 видно, что время неподвижности интактных крыс, получавших тамоксифен, достоверно снижалось в фазы диэструса и метэструса по сравнению с контролем 1 и группой самок, получавших 17α-Э2. В стадию проэструса тамоксифен повышал продолжительность иммобильности по сравнению с контролем 1 и группой крыс, получавших 17α-Э2. Кроме того, тамоксифен нарушал фазность цикла и на 7-10 день введения препарата стадия эструса у крыс отсутствовала. Таким образом, при среднем уровне эстрогенов в крови в стадии диэструса и метэструса тамоксифен оказывал антидепрессивное действие. При высоком содержании эстрогенов в крови в фазу проэструса данный препарат проявлял депрессогенный эффект.
Р
ис. 1. Влияние тамоксифена на депрессивноподобное поведение интактных самок крыс в тесте Порсолта.
Группы животных: 1 – интактные (контроль 1); 2 – получавшие 17β-Э2; 3 – получавшие 17α-Э2; 4 – получавшие тамоксифен; * - различия между фазами полового цикла достоверны при р < 0,05; # - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1.
Как видно из таблицы 1, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний эстрогенов в течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются значительными изменениями аффективного поведения. Так, в фазу диэструса при естественном среднем уровне эстрогенов в крови животных хроническое введение препарата вызывает анксиогенное действие, что выражается в преобладании фризинга. Однако при наиболее высоком уровне секреции эстрадиола в стадию проэструса тамоксифен проявляет анксиолитический эффект. В тесте «открытое поле» тамоксифен выраженно угнетает эмоциональный компонент поведения. Вместе с тем, в фазу метэструса при постепенном снижении уровня эндогенного эстрадиола тамоксифен не влияет на аффективное поведение животных. Таким образом, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний эстрогенов в течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются значительными изменениями аффективного поведения.
Влияние генистейна на аффективный статус интактных самок
Хроническое введение генистейна интактным крысам (рис. 2) достоверно снижало время иммобильности в стадиях диэструса, проэструса и метэструса по сравнению с контрольными животными и группой самок, которые получали 17α-Э2. В стадию эструса данный показатель на фоне генистейна не изменялся по сравнению с контролем 1, но был меньше по сравнению с группами животных, получавших 17α-Э2 или 17β-Э2. Таким образом, генистейн оказывал ярко выраженный антидепрессивный эффект в фазах диэструса, проэструса и метэструса и не влиял на степень депрессии в стадию эструса. Результаты исследований показали, что генистейн не влиял на тревожное поведение самок крыс, которые находились в стадии диэструса, а также не оказывал влияния на параметры поведения в условиях «открытого поля» (табл. 1, 2). Хроническое введение генистейна снижало уровень тревожности у животных в фазу проэструса, о чем свидетельствует увеличение числа заходов в «открытые» и «закрытые» рукава и числа «обследованных» норок, а также снижение эмоциональности крыс в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле». В фазу эструса препарат проявлял анксиолитическое действие, что подтверждается увеличением времени нахождения крыс в «открытых» рукавах
Таблица 1
Влияние эстрального цикла 17α- и 17β-эстрадиола, СЭРМ на поведение интактных самок крыс в «приподнятом крестообразном лабиринте»
|
Группы животных (n=10)
|
Время пребывания в открытых рукавах (сек) |
Время нахождения в закрытых рукавах (сек) |
Количество заходов в открытые рукава |
Количество заходов в закрытые рукава |
|
Интактные самки + физиол. р-р (контроль 1) | ||||
|
диэструс |
86,0 ± 6,20 |
214,0 ± 8,60 |
1,2 ± 0,4 |
2,0 ± 0,4 |
|
проэструс |
36,4 ± 3,40* |
263,6 ± 6,40 |
1,0 ± 0,2 |
4,5 ± 0,2* |
|
эструс |
42,6 ± 4,20* |
257,4 ± 8,40 |
1,0 ± 0,2 |
4,0 ± 0,6* |
|
метэструс |
80,0 ± 4,80 |
220,0 ± 10,20 |
1,4 ± 0,6 |
2,2 ± 0,4 |
|
Интактные самки + 17α-эстрадиол | ||||
|
диэструс |
100,0 ± 3,5# |
200,0 ± 3,2# |
5,0 ± 0,4# |
6,0 ±0,4# |
|
проэструс |
289,0 ± 3,2# |
11,0 ± 3,2# |
0,5 ± 0,1# |
0,5 ± 0,1# |
|
эструс |
283,6 ± 4,3# |
16,5 ± 4,3# |
0,5 ± 0,1# |
0,5 ± 0,1# |
|
метэструс |
108,0 ± 2,4# |
192,0 ± 2,4# |
4,0 ± 0,4# |
5,2 ± 0,4# |
|
Интактные самки + 17β-эстрадиол | ||||
|
диэструс |
Фаза отсутствовала | |||
|
проэструс |
Фаза отсутствовала | |||
|
эструс |
80,3 ± 3,0# |
219,7 ± 2,9# |
3,4 ± 0,2# |
4,4 ± 0,3 |
|
метэструс |
Фаза отсутствовала | |||
|
Интактные самки + тамоксифен | ||||
|
диэструс & |
299,3 ± 0,70 # |
10,0 ± 8,90 #& |
0,1 ± 0,01 #& |
0,3 ± 0,10 #& |
|
проэструс |
220,0 ± 4,60 #& |
70,0 ± 3,50 #& |
2,0 ± 0,20 # |
3,0 ± 0,20 #& |
|
эструс |
Фаза отсутствовала | |||
|
метэструс |
105,0 ± 2,60 # |
190,0 ± 5,60 # |
1,5 ± 0,20& |
1,5 ± 0,20& |
|
Интактные самки + генистейн | ||||
|
диэструс |
90,0 ± 2,0 |
210,0 ± 2,0 |
1,0 ± 0,2# & |
2,0 ± 0,2& |
|
проэструс |
50,0 ± 0,9# & |
250,0 ± 1,0 # & |
4,0 ± 0,3 #& |
5,0 ± 0,3& |
|
эструс |
269,0 ± 1,4 # $ |
31,6 ± 1,4 # $ |
1,0 ± 0,2$ |
1,0 ± 0,2 # $ |
|
метэструс |
60,2 ± 0,7 #& |
239,8 ± 0,7 #& |
5,0 ± 0,4 # |
6,0 ± 0,4 # |
|
Интактные самки + климадинон | ||||
|
диэструс & |
297,0 ± 2,50 & # |
12,0 ± 6,50& |
0 |
0,2 ± 0,09 & # |
|
проэструс |
85,0 ± 6,50 & # |
215,0 ± 6,50& |
8,0 ± 2,70& |
9,0 ± 2,70 & # |
|
эструс |
70,0 ± 4,50 & #$ |
230,0 ± 4,50&$ |
4,0 ± 1,50& |
5,0 ± 1,50& |
|
метэструс |
88,0 ± 10,20& |
222,5 ± 13,20& |
1,5 ± 0,50& |
3,7 ± 0,70 & # |
Примечание: * - различия между фазами полового цикла в контрольной группе достоверны при p < 0,05 по сравнению с фазой диэструса; # - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с контролем 1 в соответствующей фазе; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17α-эстрадиол; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17β-эстрадиол.
лабиринта, повышением исследовательского поведения и снижением эмоциональности в условиях «открытого поля». У крыс в стадию метэструса генистейн повышал время и число заходов в «открытые» рукава. Эти данные коррелировали со снижением эмоционального компонента в тесте «открытое поле», что указывает на анксиолитический профиль препарата у интактных самок в данной фазе.
Таблица 2
Влияние эстрального цикла, 17α- и 17β-эстрадиола и СЭРМ на поведение интактных самок крыс в тесте «открытое поле» в течение 180 сек
|
Группы животных (n=9) |
Параметры | |||||||||
|
Двигательная активность |
Исследовательская активность |
Эмоциональность | ||||||||
|
Перемещение |
Вставание |
Груминг |
Дефекация | |||||||
|
Интактные самки + физиол. раствор (контроль 1) | ||||||||||
|
Диэструс |
45,6 ± 2,4 |
11,6 ± 0,4 |
1,6 ± 0,2 |
2,6 ± 0,4 |
2,6 ± 0,4 | |||||
|
Проэструс |
26,8 ± 1,2* |
2,8 ± 0,2* |
3,0 ± 0,2 |
3,0 ± 0,2 |
2,8 ± 0,2 | |||||
|
Эструс |
63,7 ± 3,8* |
14,7 ± 1,8 |
3,7 ± 0,4 |
3,3 ± 0,8 |
2,0 ± 0,2 | |||||
|
Метэструс |
55,6 ± 2,8* |
12,3 ± 0,8 |
7,1 ± 0,6 |
3,8 ± 0,8 |
0,6 ± 0,02* | |||||
|
Интактные самки + 17α-эстрадиол | ||||||||||
|
Диэструс |
20,8 ± 10,2# |
7,8 ± 0,7# |
1,3 ± 0,6 |
3,3 ± 0,6 |
0 | |||||
|
Проэструс |
42,7 ± 4,6# |
12,8 ± 1,7# |
2,0 ± 0,5# |
4,8 ± 0,4# |
0 | |||||
|
Эструс |
37,3 ± 3,4# |
10,2 ± 2,4# |
1,9 ± 0,4# |
4,0 ± 0,9 |
0 | |||||
|
Метэструс |
98,5 ± 4,3# |
12,4 ± 1,8 |
5,6 ± 0,5# |
3,0 ± 0,4 |
0 | |||||
|
Интактные самки + 17β-эстрадиол | ||||||||||
|
Диэструс |
Фаза отсутствовала | |||||||||
|
Проэструс |
Фаза отсутствовала | |||||||||
|
Эструс |
22,9 ± 1,2# |
2,3 ± 0,3# |
2,6 ± 0,4# |
0,5 ± 0,2# |
5,0 ± 0,7# | |||||
|
Метэструс |
Фаза отсутствовала | |||||||||
|
Интактные самки + тамоксифен | ||||||||||
|
Диэструс |
77,1 ± 4,4# $ |
8,1 ± 1,0# |
3,0 ± 0,4# $ |
0,3 ± 0,1# $ |
0,5 ± 0,1# | |||||
|
Проэструс |
45,3 ± 2,1# |
2,6 ± 0,6 $ |
2,8 ± 0,8 |
0,9 ± 0,1# $ |
0,6 ± 0,02# | |||||
|
Эструс |
Фаза отсутствовала | |||||||||
|
Метэструс |
80,3 ± 0,8# |
1,5 ± 0,3#$ |
5,1 ± 0,2# |
0,2 ± 0,02#$ |
0,2 ± 0,01# | |||||
|
Интактные самки + генистейн | ||||||||||
|
Диэструс |
16,0 ± 0,9# |
7,0 ± 1,0# |
1,5 ± 0,2 |
3,3 ± 0,9# |
0 | |||||
|
Проэструс |
72,3 ± 1,5#$ |
11,0 ± 0,6# |
4,0 ± 0,6#$ |
2,3 ± 0,3#$ |
0 | |||||
|
Эструс |
29,3 ± 3,2# |
9,0 ± 0,6#& |
5,0 ± 0,5#$& |
1,0 ± 0,2#$ |
3,6 ± 0,5# | |||||
|
Метэструс |
12,0 ± 1,2#$ |
3,0 ± 0,4#$ |
4,0 ± 0,6# |
1,0 ± 0,2#$ |
1,0 ±0,2# | |||||
|
Интактные самки + климадинон | ||||||||||
|
Диэструс |
27,3 ± 1,0# |
10,8 ± 1,3$ |
3,5 ± 0,3#$ |
5,6 ± 1,4#$ |
1,3 ± 0,8# | |||||
|
Проэструс |
20,0 ± 1,5#$ |
3,0 ± 0,2$ |
3,0 ± 0,2 |
1,0 ± 0,1#$ |
0 | |||||
|
Эструс |
43,8 ± 1,5#$ |
6,3 ± 1,7#$& |
7,2 ± 0,4#$& |
2,0 ± 0,2#$ |
0,5 ± 0,1#$ | |||||
|
Метэструс |
33,4 ± 1,3#$ |
4,6 ± 0,9#$ |
3,0 ± 0,6#$ |
2,3 ± 0,8 |
0,3 ± 0,1# | |||||
Примечание: * - различия между фазами полового цикла в контрольной группе достоверны при p < 0,05 по сравнению с фазой диэструса, # - различия достоверны при <0,05 по сравнению с контролем 1; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17α-эстрадиол; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17β-Э2.
Рисунок 2. Влияние генистейна на депрессивноподобное поведение интактных самок крыс в тесте Порсолта.
Группы животных: 1 – контроль 1; 2 – получавшие 17β-Э2; 3 – получавшие 17α-Э2; 4 – получавшие генистейн
* - различия между фазами полового цикла достоверны при р < 0,05; # - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1.
Таким образом, можно утверждать, что генистейн проявлял анксиолитическое действие независимо от уровня эндогенных эстрогенов в крови у животных.
следующая страница>